突變型P-,53-和Fas-Fas-L在急性百草枯中毒大鼠腎臟中的表達以及褪黑素對其影響的研究.pdf

1、目的：百草枯(paraquat，PQ)是目前世界范圍內(nèi)廣泛使用的除草劑。隨著其在我國農(nóng)業(yè)上的廣泛應(yīng)用，百草枯中毒也日趨增多。百草枯除草效果好，但它對人和動物均有較強毒性。百草枯可以經(jīng)呼吸道吸入、消化道吸收及皮膚接觸三種途經(jīng)進入體內(nèi)，造成急性中毒。目前其發(fā)病機制尚未完全闡明，也無特效治療藥物，臨床病死率高。因此百草枯中毒所引起的機體病理生理改變成為當(dāng)前中毒治療學(xué)的研究熱點。百草枯進入機體后，主要損傷肺臟，其次是腎臟，并以原形從腎臟排出，所

2、以腎功能的健全對清除體內(nèi)已吸收的百草枯至關(guān)重要。但是，在急性百草枯中毒中，腎損傷的具體機制還不十分清楚。本研究通過觀察急性百草枯中毒大鼠模型的腎組織病理學(xué)改變，通過測定腎組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)的活力和丙二醛(MDA)的含量，并采用免疫組織化學(xué)方法觀察腎組織中突變型P53蛋白、腫瘤壞死因子家族中Fas-L及其細(xì)胞表面受體Fas的表達，以及褪黑素(melatonin，MT)，對其表達的影響，

3、探討急性百草枯中毒導(dǎo)致腎損傷的機制以及褪黑素(MT)對其的治療作用。 方法：選用健康成年SD大鼠108只(雌雄各半)，隨機分為3組：正常對照組(A組)36只，單純?nèi)径窘M(B組)36只，褪黑素治療組(C組)36只。 結(jié)果：B、C組一次性給予25mg/Kg PQ組MT明顯增加了染毒大鼠腎組織SOD活力，1d、3d、5d及7d時段SOD活力均較B組明顯升高(P＜0.05)；但1d與3d時段仍低于A組(P＜0.01)，其它時段與

4、A組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。(3)B組大鼠腎組織GSH-Px活力染毒后1d和3d時段明顯低于A組(P＜0.05)，5d及以后時段腎組織GSH-Px活力升高，與A組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；C組MT明顯增加了染毒大鼠腎組織GSH-Px活力，1d和3d時段GSH-Px活力較B組增高(P＜0.01)，所有時段與A組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 HE染色結(jié)果：A組光鏡下觀察可見腎小球、腎小管及腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常。B組腎小球

5、內(nèi)可見紅細(xì)胞輕度增多，腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生腫脹、變性，腎小管腔變窄，并出現(xiàn)上皮細(xì)胞壞死脫落。腎間質(zhì)水腫、充血伴炎性細(xì)胞浸潤℃組MT明顯減輕了大鼠腎小球充血、腎小管上皮細(xì)胞水腫、滲出及壞死等病理改變。治療前后突變型P53、Fas和Fas-L免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果：(1)A組正常大鼠腎組織中突變型P53無表達或有微弱表達，主要分布在腎小管上皮細(xì)胞的胞核中。B組大鼠在染毒1d腎組織中突變型P53的表達即明顯強于A組(P＜0.01)，主要分布在腎小

6、管上皮細(xì)胞的胞核中，其表達呈持續(xù)高水平，10d有所下降，至14d仍高于A組(P＜0.01)℃組MT明顯抑制了染毒大鼠腎組織中突變型P53的表達，與B組比較所有時段均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，與A組比較所有時段均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。(2)A組正常大鼠腎組織中Fas蛋白無表達或有微弱表達，主要分布在腎小管上皮細(xì)胞的胞質(zhì)中。B組大鼠在染毒1d腎組織中Fas的表達即明顯強于A組(P＜0.01)，主要分布在腎小管上皮細(xì)胞的胞漿中，其

7、表達呈持續(xù)高水平，7d有所下降，至14d仍高于A組(P＜0.01)。C組MT明顯抑制了染毒大鼠腎組織中Fas的表達，與B組比較1d至7d有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，其余時段均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，與A組比較所有時段均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。(3)A組正常大鼠腎組織中Fas-L蛋白無表達或有微弱表達，主要分布在腎小管上皮細(xì)胞的胞質(zhì)中。B組大鼠在染毒1d腎組織中Fas-L的表達即明顯強于A組(P＜0.01)，主要分布在腎小管

8、上皮細(xì)胞的胞漿中，其表達呈持續(xù)高水平，10d有所下降，至14d仍高于A組(P＜0.01)℃組MT明顯抑制了染毒大鼠腎組織中Fas-L，的表達，與B組比較1d至7d有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，其余時段均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，與A組比較所有時段均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論：(1)百草枯腹腔注射染毒后，可引起急性腎損傷；(2)百草枯腹腔注射染毒后，可使大鼠腎組織中MDA含量增高，SOD和GSH-Px活力下降，提示體