CELI的分離及水稻TILLING突變庫(kù)的創(chuàng)建.pdf

1、TILLING是一種新的反向遺傳學(xué)研究技術(shù)，它將特異性堿基錯(cuò)配識(shí)別酶和PCR技術(shù)結(jié)合起來(lái)對(duì)誘發(fā)突變或自然變異進(jìn)行檢測(cè)。該技術(shù)不僅可應(yīng)用于模式植物，而且可應(yīng)用于重要的農(nóng)作物，在水稻中具有廣闊的應(yīng)用前景。CELI是TILLING檢測(cè)點(diǎn)突變所需要的一個(gè)關(guān)鍵酶，而突變庫(kù)則是開(kāi)展TILLING研究必不可少的。本文首次分析了幾種不同因素對(duì)芹菜CELI核酸酶提取量的影響，并建立了秈稻品種9311的突變庫(kù)，為進(jìn)一步開(kāi)展水稻TILLING研究奠定了基礎(chǔ)。

2、 分析了品種、器官、發(fā)育時(shí)期和提取緩沖液pH值等因素對(duì)芹菜CEILI提取量的影響。不同芹菜品種和器官的CELI提取量具有明顯的差異，在所用的3個(gè)不同品種中，泰國(guó)芹的CELSI核酸酶提取量最高(52.4μg/100g)，文圖拉次之(42.1μg/100g)，雪白芹則最低(30.91ug/100g)；而在同一品種的3個(gè)不同器官中，則表現(xiàn)為葉>莖>根，不同品種間和不同器官間的CELI提取量差異分別達(dá)到了顯著和極顯著水平。以上海黃心芹為

3、材料比較了發(fā)育時(shí)期對(duì)提取量的影響，生殖生長(zhǎng)期植株的CELI核酸酶提取量明顯高于營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期。此外，緩沖液pH值對(duì)CELI提取量也有明顯的影響，在pH 7.7的緩沖液提取環(huán)境下，CELI核酸酶提取量明顯高于pH5.0和pH9.0的環(huán)境。該研究結(jié)果有助于建立高效的CELI提取方法。 對(duì)CELI酶的粗提物的活性檢測(cè)進(jìn)行了研究。錯(cuò)配切割實(shí)驗(yàn)表明，CELI酶能有效地在eGFP基因中錯(cuò)配位點(diǎn)進(jìn)行切割，并可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳獲得直觀的檢測(cè)結(jié)果

4、，從而可以用于TILLING分析。該研究結(jié)果對(duì)于建立簡(jiǎn)易而又有效的點(diǎn)突變檢測(cè)方法具有重要的意義。 用化學(xué)誘變劑EMS對(duì)秈稻品種9311進(jìn)行了誘變處理，構(gòu)建了突變體庫(kù)。在M2代對(duì)各種突變性狀進(jìn)行了觀察和記載。在887個(gè)家系中，共發(fā)現(xiàn)了1683個(gè)突變株，分布于696個(gè)突變家系中。EMS誘發(fā)突變類(lèi)型豐富，突變性狀涉及到葉片、莖桿、穗部、生育期、生理性狀等多種類(lèi)型。已篩選到EMS誘變產(chǎn)生的突變體1472份，其中有些突變體是以往同類(lèi)研究中