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文檔簡(jiǎn)介
1、大豆是重要的經(jīng)濟(jì)作物之一,是植物油及植物性蛋白等營(yíng)養(yǎng)素的重要來(lái)源。近年來(lái)由于受到國(guó)外進(jìn)口轉(zhuǎn)基因大豆的影響,我國(guó)的大豆種植面積不斷減少,面臨著嚴(yán)重的產(chǎn)業(yè)危機(jī)。大豆的生長(zhǎng)發(fā)育很容易受到外界環(huán)境的影響,環(huán)境中的諸多非生物因素如鹽堿、干旱、低溫等逆境脅迫會(huì)影響大豆的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程,嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致大規(guī)模減產(chǎn)。針對(duì)上述難題,除了可通過(guò)傳統(tǒng)育種的方法來(lái)增加大豆單產(chǎn)水平,還可以利用基因工程培育抗逆性新品種,從而使之更好地適應(yīng)不同的生長(zhǎng)環(huán)境,進(jìn)而可以在不
2、與主要糧食爭(zhēng)田的情況下拓展大豆的種植面積,這對(duì)提高大豆的總產(chǎn)量具有非常重要的意義。
本研究首先構(gòu)建了含抗草甘膦標(biāo)記基因的植物表達(dá)載體pES002,再將Trihelix家族類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子GmGT-2A基因克隆到植物表達(dá)載體pES002上;而后以浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物與核技術(shù)利用研究所杭州國(guó)家大豆改良分中心保存的“華春6號(hào)”、“浙春3號(hào)”、“0428”三個(gè)品種為受體材料,分別使用子葉節(jié)和胚尖作為遺傳轉(zhuǎn)化體系的外植體,將植物表達(dá)載體pES
3、002-GmGT-2A導(dǎo)入到大豆基因組中,以期獲得抗逆性明顯提高的大豆新種質(zhì)。本研究主要取得了如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
1、植物表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化驗(yàn)證。以植物表達(dá)載體pBA002為基礎(chǔ)載體,使用抗草甘膦CP4-EPSPS基因替換原載體的Bar篩選標(biāo)記基因,獲得新的植物表達(dá)載體pES002。將大豆耐逆相關(guān)Trihelix類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子GmGT-2A連接到pES002,構(gòu)建了同時(shí)含耐逆相關(guān)基因和抗除草劑標(biāo)記基因的植物表達(dá)載體pES002-Gm
4、GT-2A。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序浸潤(rùn)法轉(zhuǎn)化擬南芥,并對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行抗草甘膦和耐鹽性鑒定。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因植株在抗草甘膦和耐鹽性上均顯著強(qiáng)于對(duì)照,表明該載體可以用于轉(zhuǎn)基因相關(guān)的基因功能研究。
2、農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化。本研究分別以三個(gè)大豆品種“0428”、“浙春3號(hào)”、“華春6號(hào)”的子葉節(jié)和胚尖作為受體材料,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的子葉節(jié)法和胚尖法對(duì)上述受體材料進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化后的植株經(jīng)目的基因GmGT-2A和篩選標(biāo)記基因CP
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