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1、5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶EPSPS是莽草酸途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶,是許多抗生素、除草劑作用的首選靶標(biāo)酶。草甘膦是一種廣譜型滅生性除草劑,植物中EPSP合成酶的過(guò)量表達(dá)或某些活性位點(diǎn)氨基酸的突變對(duì)高劑量的草甘膦有較強(qiáng)的耐受性。 本實(shí)驗(yàn)根據(jù) EPSP 合成酶基因的保守序列設(shè)計(jì)一對(duì)簡(jiǎn)并引物,以青麻 (Abutilon TheophrastiMedic)的總DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,克隆出epsps基因的部分DNA片段,長(zhǎng)度
2、為1446bp,利用Trizol Reagent 改良RNA提取方法提取青麻 RNA,以青麻的總RNA為反轉(zhuǎn)錄的模板,采用RACE技術(shù)克隆、拼結(jié)出了青麻epsps基因的全長(zhǎng)cDNA序列。該序列長(zhǎng)為1886bp,5′UTR長(zhǎng)64bp,3′UTR長(zhǎng)280bp,3′端有ployA尾巴,G+C含量44.80﹪,編碼了523個(gè)氨基酸。 同源比較該段序列所編碼的氨基酸序列可以發(fā)現(xiàn)EPSP合成酶有較高的保守性,與歐洲山毛櫸、水稻、擬南芥、菜豆
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