蒼白球Orexin-A的生物學(xué)效應(yīng)及其與帕金森病發(fā)病的關(guān)系.pdf

1、蒼白球是基底神經(jīng)節(jié)間接環(huán)路中的重要核團(tuán)，在機(jī)體運(yùn)動(dòng)功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，其結(jié)構(gòu)和功能異常與多種神經(jīng)退行性疾病如帕金森病關(guān)系密切。Orexin是下丘腦神經(jīng)肽家族成員之一，可直接參與機(jī)體運(yùn)動(dòng)功能調(diào)節(jié)。形態(tài)學(xué)研究證實(shí)，蒼白球接受來(lái)自下丘腦的Orexin能神經(jīng)纖維支配，并表達(dá)Orexin1（OX1）受體。腦內(nèi)Orexin遞質(zhì)系統(tǒng)與帕金森病密切相關(guān)。帕金森病晚期患者下丘腦Orexin能神經(jīng)元退變甚至缺失，腦脊液中Orexin水平顯著降低，且Or

2、exin水平與帕金森病嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。目的：探討Orexin-A對(duì)正常和6-羥基多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）帕金森病模型大鼠蒼白球神經(jīng)元電活動(dòng)的調(diào)節(jié)；不同年齡組正常大鼠和帕金森病模型大鼠蒼白球 OX1受體的表達(dá)；以及整體狀態(tài)下 Orexin-A對(duì)氟哌啶醇帕金森病僵直模型大鼠偏轉(zhuǎn)行為的影響。
　　方法：采用多管微電極給藥在體細(xì)胞外電生理記錄、6-OHDA帕金森病模型大鼠制備、氟哌啶醇帕金森病僵直模型大

3、鼠制備、核團(tuán)埋管術(shù)、免疫組織化學(xué)染色、行為學(xué)測(cè)試等實(shí)驗(yàn)方法。
　　結(jié)果：
　　1.在正常大鼠記錄到的38個(gè)蒼白球神經(jīng)元，微壓力注射0.01mM的Orexin-A使平均自發(fā)放電頻率由14.22±2.15 Hz升高到18.48±2.42 Hz，平均增加24.95±6.20％，注藥后與注藥前相比，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；與生理鹽水組相比，差別亦有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。Orexin-A可使其中12個(gè)神經(jīng)元

4、的放電頻率增加超過(guò)20%，由9.43±2.27 Hz增加至13.74±2.96 Hz，平均增加67.65±11.24%。
　　2.正常大鼠蒼白球微壓力注射0.01mM的Orexin-A和0.1mM的OX1受體阻斷劑SB-334867混合物，在記錄到的10個(gè)Orexin-A興奮效應(yīng)超過(guò)20%（平均升高57.38±8.49%）的神經(jīng)元中，Orexin-A和SB-334867混合物使放電頻率由11.37±3.63 Hz升高到14.90±

5、4.83 Hz，平均升高29.74±6.39%，與單獨(dú)Orexin-A組相比增加百分?jǐn)?shù)顯著降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.在6-OHDA帕金森病模型大鼠損毀側(cè)記錄到的34個(gè)蒼白球神經(jīng)元中，微壓力注射0.01mM的Orexin-A使平均自發(fā)放電頻率由9.02±2.07 Hz升高到12.43±2.01 Hz，平均升高59.96±12.74%，與注藥前相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；與生理鹽水組相比，差別亦有統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。Orexin-A對(duì)其中14個(gè)神經(jīng)元興奮效應(yīng)超過(guò)20%，由4.23±1.01 Hz增加至7.85±1.74 Hz，平均增加107.43±15.78%。帕金森病模型大鼠損毀側(cè)Orexin-A的興奮效應(yīng)較正常大鼠明顯增強(qiáng)（P<0.001），較損毀對(duì)側(cè)亦明顯增強(qiáng)（P<0.001）。
　　4.免疫組織化學(xué)染色顯示，不同年齡組大鼠蒼白球神經(jīng)元OX1受體表達(dá)情況不同。大鼠生后2周開(kāi)始有OX1受體表達(dá)，3周達(dá)到高峰并一

7、直持續(xù)到8周，12周開(kāi)始表達(dá)略有降低。帕金森病模型大鼠損毀側(cè)蒼白球 OX1受體表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)明顯降低，與同年齡組正常大鼠相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　5.單側(cè)蒼白球微量注射Orexin-A對(duì)氟哌啶醇僵直模型大鼠偏轉(zhuǎn)行為的研究顯示，Orexin-A可以使實(shí)驗(yàn)大鼠發(fā)生明顯對(duì)側(cè)偏轉(zhuǎn)，與生理鹽水對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)論：Orexin-A可以興奮正常大鼠和帕金森病模型大鼠蒼白球神經(jīng)元，

8、使其放電頻率增加，而且這種興奮效應(yīng)主要通過(guò) OX1受體實(shí)現(xiàn)。Orexin-A對(duì)帕金森病模型大鼠的興奮效應(yīng)較正常大鼠明顯增強(qiáng)。正常大鼠蒼白球神經(jīng)元和帕金森病模型大鼠蒼白球神經(jīng)元均有OX1受體的表達(dá)，帕金森病時(shí)蒼白球OX1受體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)降低。Orexin-A可以改善氟哌啶醇模型大鼠的僵直癥狀，提示 Orexin-A具有潛在改善帕金森病運(yùn)動(dòng)障礙的功能。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果為蒼白球 Orexin-A遞質(zhì)系統(tǒng)在帕金森病發(fā)病機(jī)制及防治中的作用提供了一定的理