三種核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖、分化及分泌脂肪因子的影響.pdf

1、目的：1、研究司他夫定(D4T)、齊多夫定(AZT)和去羥肌苷(DDI)對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響。 2、觀察D4T、AZT和DDI對處于增殖和分化過程中的3T3-L1前脂肪細(xì)胞分泌胰島素樣生長因子-1(IGF-1)，以及成熟脂肪細(xì)胞分泌脂聯(lián)素(APN)的影響。 通過上述研究，探討HIV/AIDS患者接受高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)后出現(xiàn)脂肪萎縮的發(fā)生機制。 方法：1、將不同濃度的D4T、AZ

2、T和DDI(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)作用于CFSE標(biāo)記的3T3-L1前脂肪細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞增殖情況。 2、選擇D4T(1μg/ml、4μg/ml)、AZT(0.1μg/ml、1μg/ml)或DDI(1μg/ml、10μg/ml)作用于3T3-L1前脂肪細(xì)胞，使用MTT比色法測定細(xì)胞增殖情況。 3、將不同濃度的D4T、AZT和DDI(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)作用于

3、3T3-L1前脂肪細(xì)胞，誘導(dǎo)分化至第8天，使用油紅0脂肪染色法觀察細(xì)胞分化情況。 4、收集3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化過程中的培養(yǎng)上清液，應(yīng)用ELISA方法測定APN和IGF-1水平。 結(jié)果：1、流式細(xì)胞儀CFSE標(biāo)記法檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，不同濃度D4T干預(yù)組(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)的增殖指數(shù)降低程度分別為19.1％、39.8％和50.8％；AZT干預(yù)組(0.1μg/ml、1μg/m

4、l、10μg/ml)的降低程度分別為6.7％、18.1％和30.9％。MTT比色法也證實D4T和AZT能夠減弱3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖能力。 2、高濃度D4T(10μg/ml)和AZT(10μg/ml)能夠抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化能力，造成成熟脂肪細(xì)胞數(shù)量減少。 3、ELISA檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞增殖過程中，與對照組相比，不同濃度D4T干預(yù)組(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)中的IGF-1含量下

5、降程度分別為21.5％、31.7％和48.7％；D4T還能降低分化第8天的成熟脂肪細(xì)胞分泌IGF-1的能力，呈濃度依賴性，下降程度分別為10.5％、30.7％和42.6％；而AZT(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)僅能降低增殖過程中前脂肪細(xì)胞分泌IGF-1的能力，與對照組相比下降程度分別為8.6％、21.7％和29.5％。 4、與對照組相比，在10μg/ml的D4T干預(yù)組和AZT干預(yù)組中，成熟脂肪細(xì)胞分泌的APN

6、水平下降。 5、DDI對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖、分化和IGF-1、APN的分泌未見明顯影響。 結(jié)論：1、本研究首次發(fā)現(xiàn)D4T能夠降低3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖能力，為濃度依賴性；同時證實AZT能夠降低3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖能力。 2、本研究證實了D4T和AZT能夠抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化能力，使成熟脂肪細(xì)胞數(shù)量下降。 3、本研究首次在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，D4T和AZT均能夠減弱增殖過程中的前