人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞吞噬動力學(xué)及吞噬過程中cAMP濃度的變化.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞吞噬動力學(xué)及吞噬過程中cAMP濃度的變化姓名：孫昱昭申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：洪晶20020601室溫下，于暗處用終濃度為10ug／ml的FITC液孵育以蔗糖密度梯度法提取的ROS1小時，然后以細(xì)胞培養(yǎng)液調(diào)整濃度為1107rnl～。4乳膠微球的制備以細(xì)胞培養(yǎng)液調(diào)整濃度至lX107ml～。5吞噬動力學(xué)觀察向每個培養(yǎng)孔(6孔板)中加入1107ml。的FITC—ROS或LB懸液2rrd

2、，進(jìn)行孵育。分別在孵育5min、15rain、30min、15h、3h、6h、12h、18h、24h、36h、48h的時候，將孵育液吸出，以4。C的無血清DMEM沖洗二次，以終止吞噬。采用雙重?zé)晒鈽?biāo)記法，于上述相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)時間點(diǎn)，在熒光顯微鏡下以非選擇性濾光片動態(tài)觀察HRPE細(xì)胞的吞噬過程。6掃描及透射電鏡經(jīng)與ROS或LB孵育6h后，加入25％的戊二醛固定，備電鏡觀察。7細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度的檢測實(shí)驗(yàn)組每個培養(yǎng)孔(24孔板)中加入1107r

3、nl“的ROS或LB懸液lml，對照組加入培養(yǎng)液lml／孑L進(jìn)行孵育，終止吞噬的時間及方法同上。向終止反應(yīng)后的HRPE細(xì)胞中加入無血清DMEM液(PH74)200ul／孑l，立即放人沸水中煮沸3min。從每個孔中取上清液100ul備125I—cAMP放射免疫檢測。8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果每個實(shí)驗(yàn)點(diǎn)至少重復(fù)3次，計(jì)算均值標(biāo)準(zhǔn)差(叉s)。用Student’st檢驗(yàn)，比較實(shí)驗(yàn)組與對照組數(shù)值，P005為統(tǒng)計(jì)學(xué)上有明顯差異的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果一、HRPE細(xì)胞吞噬