VEGF基因在漢族先天性房室間隔缺損患者中的突變分析.pdf

1、背景：先天性房室間隔缺損（Atrioventricular septal defect, AVSD）是先天性心臟病的一種，又稱為心內膜墊缺損，是由于存在房室間隔（房間隔下部、室間隔上部）以及中央心內膜墊組織的缺損而造成左右心腔之間的異常交通。根據其缺損的類型可分為部分性、過渡性及完全性三種類型，其中以完全性AVSD 的病情最嚴重。AVSD 病人往往早期即出現明顯的心力衰竭和肺動脈高壓；而且由于房室瓣膜（二尖瓣、三尖瓣或房室共同瓣）失去心

2、內膜墊組織的支撐，外科手術治療效果很差；其他類型AVSD 也依缺損的類型、大小及合并其他畸形等情況而嚴重程度不同。AVSD 患者既存在于散發(fā)人群中，也有家族性病例報道；很多病例還合并有一些綜合征，最常見的是唐氏綜合征（Down Syndrome），大約2/3 的唐氏綜合癥患者合并有先天性心臟病，其中將近一半是AVSD，表現出明顯的密集發(fā)病現象，其原因目前不明；而先心病同時也是唐氏綜合征患者最主要的死亡原因之一。AVSD 的發(fā)生機制尚未明

3、了。心臟的房間隔下部、室間隔上部以及二尖瓣、三尖瓣等組織均由胚胎早期的房室心內膜墊（AV EndocardialCushion）發(fā)育而成，任何可以影響心內膜墊發(fā)育環(huán)節(jié)的因素，都有可能導致AVSD 的形成。先前的研究表明血管內皮生長因子(vascularendothelial growh factor，VEGF) 信號通路在胚胎心內膜墊的形成過程中發(fā)揮重要作用。因此我們推測位于染色體6p12 上VEGF 基因很有可能是AVSD 的侯選基因

4、。然而到目前為止，國內外仍然沒有明確VEGF 基因是否與AVSD 的發(fā)生有關聯。因此本研究通過對123例不同類型的AVSD 患者VEGF 的8 個編碼外顯子及其側翼測序進行研究分析，以調查AVSD 患兒中VEGF 基因的突變情況，旨在揭示VEGF 基因在先天性房室間隔缺損發(fā)生中的作用，并試圖找出帶有VEGF 基因突變患者的基因型與表型的關系，為預防AVSD 的發(fā)生及制訂防治對策提供一定的科學依據。
　　 目的：①調查AVSD患兒

5、中VEGF基因的突變情況。②分析VEGF基因突變患者的基因型與表型的關系。
　　 方法：⑴收集2007 年1 月-2010 年12 月在上海市兒童醫(yī)院及上海兒童醫(yī)學中心住院治療的先天性房室間隔缺損患兒123 例。所入選的AVSD病人均經過超聲心動圖，心導管造影術或者外科手術證實。7 例合并有21-三體綜合癥患兒均經過常規(guī)染色體檢查確診。健康對照組為同期在上海市兒童醫(yī)院兒童保健科體檢的正常兒童100 例，均由家長簽署知情同意書。⑵

6、在取得每個病人和對照者家長的同意并簽署同意書后，采集2mL外周血于肝素鈉抗凝管中?；蚪MDNA 的抽提全部采用DNA 試劑盒抽提并純化，-20℃保存，擴增所有VEGF 基因8 個編碼外顯子及兩側各50 個堿基序列，通過DNA 序列測定了解有無基因突變，并分析基因變異是否導致氨基酸改變。⑶結果分析及統(tǒng)計學處理：采用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。以Hardy-Weinberg 平衡檢驗確認研究樣本的群體代表性。計數資料的比較采

7、用Fisher 精確概率法。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：①在123例患者中共發(fā)現19例位于外顯子1上的2種同義突變(17case c.C1025T aa S342S; 2 cases G225A aa E75E)，其中一種17例病例在NCBI的SNP數據庫中被提交為編碼SNP(rs25648)，4例(1 cases c. A825CaaV275V ; 1 case T708C aa E236E; 2 case

8、s A747G aa I249I)位于外顯子3上的3中同義突變，并且在100例對照組中未檢測到相同的突變。②1例患兒發(fā)現外顯子1上的插入突變（插入序列為22_23InsGACA）該患兒為男性，年齡為5個月，完全性房室間隔缺損合并21-三體綜合癥。通過對100例健康對照組樣本比較未發(fā)現相同位點的序列插入突變。這一突變導致開放閱讀框架在DNA編碼區(qū)第253-255位產生TAG終止密碼子，使得氨基酸產物從第8位即發(fā)生變化，肽鏈延長至85位氨基

9、酸既出現TAG終止密碼子。這使得VEGF的肽鏈長度由正常的412個氨基酸減少為84個氨基酸。③外顯子5上發(fā)現1例962位錯義突變（堿基變化A>G，氨基酸變化為K321R）。該患兒為女性，年齡為7歲，部分性房室間隔缺損。通過對100例健康對照組樣本比較未發(fā)現相同位點的錯義突變。④外顯子1的編碼前區(qū)15bp檢測到堿基錯義突變A>C，此位置尚不處于VEGF的啟動子區(qū)域。5.AVSD患者中VEGF基因的突變率為1.6％ (2/123)。

10、　　 結論：⑴VEGF 基因與人類的心內膜墊和房室瓣的發(fā)育有關，VEGF 基因突變與先天性房室間隔缺損的發(fā)病具有相關性。⑵VEGF 在AVSD 患兒中基因突變的檢出率并不高，提示AVSD 可能是多基因遺傳，或者潛在的環(huán)境因素抑或是環(huán)境和基因的共同作用參與了AVSD 的形。⑶推測這些與AVSD 具有一定的相關性基因的作用機制可能于VEGF 有關聯，抑或是共同作用而影響心內膜墊的缺損而導致AVSD的形成。本課題為深入探討VEGF 在AVS