Mung、Gin、L08對人肝癌細(xì)胞SMMC7721及其腫瘤干細(xì)胞CD133表達(dá)的抑制作用.pdf

1、背景和目的:
　　 肝癌(Liver Cancer)是最常見的惡性腫瘤之一,其死亡率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中列第3位。我國每年約11萬人死于肝癌。導(dǎo)致肝癌致死率高的一個(gè)主要原因是治療后(手術(shù)或放療或化療后)腫瘤的再度復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。為什么惡性腫瘤能耐受放療和化療的殺傷作用并再度復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移呢?新的研究發(fā)現(xiàn),在肝癌組織中存在著一些耐藥性的細(xì)胞稱之為癌干細(xì)胞(Cancer Stem Cells,CSCs)或腫瘤干細(xì)胞(Tumor Stem C

2、ells,TSCs)。這些細(xì)胞雖然在腫瘤組織中的數(shù)量非常少,只占腫瘤組織中細(xì)胞總數(shù)的1％,但他們能不斷分化成為腫瘤細(xì)胞并能夠不斷增殖,維持自身數(shù)目的恒定。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在腫瘤干細(xì)胞上存在著多個(gè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物,其中CD133蛋白是廣泛存在于腫瘤干細(xì)胞表面的標(biāo)志物。許多研究已經(jīng)證實(shí),CD133蛋白陽性的腫瘤細(xì)胞與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移以及耐藥性產(chǎn)生均有密切的關(guān)系。腫瘤干細(xì)胞不僅存在于腫瘤組織中,也發(fā)現(xiàn)存在于體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞系中。盡管CD13

3、3蛋白的具體生物功能目前尚不清楚,但是它對于追蹤肝癌干細(xì)胞的存在和研究其表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移以及耐藥性的產(chǎn)生之間的關(guān)系均有重要價(jià)值。
　　 己糖激酶是一個(gè)磷酸化6-碳糖的酶,特別是葡萄糖。在大多數(shù)組織和器官中,葡萄糖的磷酸化是葡萄糖代謝激活的第一步。堿性磷酸酶是一種負(fù)責(zé)從核酸、蛋白等各種底物分子上去除磷酸基團(tuán)的酶,這一過程被稱為去磷酸化。在腫瘤組織中,己糖激酶和堿性磷酸酶的活性均會(huì)升高。
　　 Mung、G

4、in和L08是本實(shí)驗(yàn)室從綠豆、生姜和靈芝(Ganoderma)中提取分離的黃酮和三萜類化合物。本實(shí)驗(yàn)使用從綠豆、生姜和靈芝中提取分離的黃酮和三萜類化合物對人肝癌細(xì)胞SMMC7721的增殖及其肝癌干細(xì)胞中CD133表達(dá)水平的抑制作用進(jìn)行了初步研究,以期為肝癌復(fù)發(fā)的預(yù)防提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 1.培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞SMMC7721至對數(shù)生長期。
　　 2.用生理鹽水配制Mung、Gin和L08為100μ

5、 g／ml、200μ g／ml、300μg／ml、400μ g／ml和500μ g／ml濃度并分別處理對數(shù)生長期的SMMC7721細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí),再用MTT法測細(xì)胞活性并繪制細(xì)胞生長曲線
　　 3.用Mung、Gin和L08處理人肝癌細(xì)胞SMMC7721并用己糖激酶和堿性磷酸酶試劑盒測定肝癌SMMC7721細(xì)胞中己糖激酶、堿性磷酸酶的活性。
　　 4.用Mung、Gin和L08處理人肝癌細(xì)胞SMMC77

6、21并用Western Blotting法測定人肝癌腫瘤干細(xì)胞中CD133蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.Mung、Gin和L08在實(shí)驗(yàn)濃度上處理人肝癌細(xì)胞SMMC772后對其增殖均有抑制作用,且濃度與抑制作用密切相關(guān)。
　　 2.Mung、Gin和L08在實(shí)驗(yàn)濃度上處理人肝癌細(xì)胞SMMC772后對己糖激酶和堿性磷酸酶的活性均有抑制作用。
　　 3.Mung和L08在實(shí)驗(yàn)濃度上處理人肝癌細(xì)胞SM

7、MC772后CD133蛋白表達(dá)水平均明顯降低,且劑量與表達(dá)水平密切相關(guān)。但Gin則不能降低人肝癌的腫瘤干細(xì)胞中CD133表達(dá)水平。
　　 結(jié)論:
　　 1.Mung、Gin和L08均有抑制人肝癌SMMC7721增殖的作用,并且這種抑制作用與濃度密切相關(guān)。
　　 2.Mung、Gin和L08均能抑制人肝癌細(xì)胞SMMC7721中己糖激酶和堿性磷酸酶的活性。
　　 3.Mung和L08能夠抑制人肝癌的腫瘤干細(xì)胞