蛛網(wǎng)膜下腔出血后不對稱二甲基精氨酸(ADMA)的表達(dá)水平及與腦血管痙攣的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　 蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后并發(fā)腦血管痙攣(CVS)在臨床中發(fā)生率較高,是SAH后致死和致殘的主要原因之一,嚴(yán)重影響患者的預(yù)后,如何預(yù)防以及逆轉(zhuǎn)腦血管痙攣是臨床亟待解決的重要課題,對改善病人的生活質(zhì)量意義重大。
　　 腦血管痙攣的研究已有多年歷史,近年的基礎(chǔ)研究已證實(shí),一些介質(zhì)在CVS發(fā)生機(jī)制中起著重要作用,包括亞鐵血紅蛋白、內(nèi)皮素(ET)、一氧化氮(NO)、蛋白激酶C(PKC)和激酶ρ等。多數(shù)學(xué)者

2、逐漸達(dá)成共識,認(rèn)為CVS是多因素多環(huán)節(jié)共同作用的結(jié)果,但觸發(fā)、維持腦血管痙攣發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程的因子并未全部為人們所認(rèn)識。
　　 目前研究表明,腦血管痙攣的發(fā)生與出血后蛛網(wǎng)膜下腔內(nèi)的舒血管物質(zhì)一氧化氮(NO)的減少密切相關(guān),其水平在出血后呈規(guī)律性變化。NO可通過激活cGMP依賴或非cGMP依賴途徑引起其它血管活性物質(zhì)(如ET-1、前列環(huán)素)水平的變化,使平滑肌細(xì)胞超極化而導(dǎo)致平滑肌細(xì)胞舒張。作為細(xì)胞間信息交換的重要載體,其參與腦血管

3、舒張活動(dòng),對于腦血流調(diào)節(jié)意義重大。
　　 NO水平下降的原因主要有兩方面:一是SAH后紅細(xì)胞溶解釋放的氧合血紅蛋白(OxyHb)對NO的“化學(xué)沉淀”作用;二為內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)合成NO能力下降。其中后者對NO的生成調(diào)控機(jī)制更是成為目前的研究熱點(diǎn)。
　　 作為內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的eNOS特異性抑制劑,ADMA能競爭性抑制內(nèi)皮細(xì)胞及巨噬細(xì)胞NOS活性,阻斷NO合成。近年來通過在心血管系統(tǒng)和的。腎臟系統(tǒng)疾病研究中已得到

4、廣泛的重視,被公認(rèn)為一種新的血管內(nèi)皮功能障礙的預(yù)測因子,但迄今為止其在顱內(nèi)血管性疾病致病機(jī)理研究中仍鮮有涉及。本研究旨在觀察ADMA在SAH后體液中的表達(dá)規(guī)律以及與NO水平、基底動(dòng)脈eNOS表達(dá)情況的動(dòng)態(tài)關(guān)系,探討其在腦血管痙攣中的可能作用及機(jī)制。
　　 方法:
　　 1、采用穿刺兔枕大池首次枕大池注入自體動(dòng)脈血,此后48h二次注血的方法,建立兔SAH后CVS模型;
　　 2、將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常對照組、假手術(shù)

5、組和SAH組;
　　 3、觀察模型動(dòng)物SAH后行為學(xué)變化;
　　 4、按照設(shè)定的時(shí)相點(diǎn)于術(shù)后1d、4d、7d行經(jīng)顱多普勒(TCD)檢測基底動(dòng)脈(BA)血流速度;
　　 5、隨機(jī)抽取各時(shí)相點(diǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行心臟灌注,行基底動(dòng)脈普通HE染色及電鏡檢查,明確SAH后基底動(dòng)脈血管病理及形態(tài)學(xué)變化;
　　 6、采集各組動(dòng)物腦脊液(CSF)及靜脈血標(biāo)本,通過酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)腦脊液及血漿中不對稱二甲基精

6、氨酸(ADMA)水平;
　　 7、按各時(shí)相點(diǎn)采集各時(shí)相點(diǎn)腦脊液,以硝酸還原法測定腦脊液中NO水平;
　　 8、采用免疫組織化學(xué)法(IHC)方法研究SAH后基底動(dòng)脈內(nèi)膜組織中eNOS的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、經(jīng)皮枕大池穿刺二次注血后可成功建立兔腦血管痙攣動(dòng)物模型,成功率可達(dá)71.9％:
　　 2、SAH組模型動(dòng)物行為學(xué)表現(xiàn)不同于正常對照組與假手術(shù)組,出現(xiàn)毛發(fā)蓬松及自潔性差,攝食減少,呈頭

7、低位蜷縮狀,活動(dòng)明顯減少。
　　 3、正常對照組與假手術(shù)組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物TCD檢測基底動(dòng)脈血流速度無明顯差異(P＞0.05),SAH組TCD檢測顯示血流流速明顯高于正常對照組,以二次注血后第4d為最高峰(P＜0.05);
　　 4、HE染色及透射電鏡證實(shí)SAH后基底動(dòng)脈血管壁增厚,管腔狹窄,內(nèi)皮細(xì)胞不同程度的變性、腫脹,空泡形成,線粒體固縮;內(nèi)彈力膜迂曲皺褶或斷裂,厚薄不均;中膜增厚,平滑肌細(xì)胞(VSMC)排列紊亂。
　

8、　 5、SAH組各時(shí)相點(diǎn)血漿ADMA水平表達(dá)無明顯差異,與對照組和假手術(shù)組亦無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);而SAH組腦脊液中ADMA水平呈規(guī)律性改變,以二次注血后4d為最高峰(P＜0.05),與腦血管痙攣時(shí)相一致,與基底動(dòng)脈血流速度正相關(guān),與對照組和假手術(shù)組差異明顯(P＜0.05)。
　　 6、SAH組各時(shí)相點(diǎn)腦脊液NO水平呈規(guī)律性變化,以二次注血后4d水平降至最低(P＜0.05),ADMA水平呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)

9、;
　　 7、SAH組術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)免疫組化染色結(jié)果顯示eNOS表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、枕大池二次注血法成功建立兔CVS動(dòng)物模型,其動(dòng)物行為學(xué)較正常對照組有特征性表現(xiàn);
　　 2、SAH后模型動(dòng)物基底動(dòng)脈流速明顯增高,呈規(guī)律性改變,術(shù)后4d能達(dá)到最高峰值;
　　 3、SAH后模型動(dòng)物的基底動(dòng)脈形態(tài)學(xué)可發(fā)生增厚、狹窄改變,其內(nèi)膜及平滑肌細(xì)胞病理學(xué)亦有明顯損害性表