牛血血紅蛋白酶法水解及產(chǎn)物抗氧化活性的研究.pdf

1、我國(guó)動(dòng)物血液資源豐富，如不加以合理開發(fā)利用，直接排放到環(huán)境中，不僅浪費(fèi)了寶貴的蛋白質(zhì)資源，而且對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重的污染。血紅蛋白作為血液中的最主要蛋白質(zhì)，由于其色澤猩紅、腥味重、不易保藏以及被人體消化吸收，而難以開發(fā)利用。利用現(xiàn)代高新技術(shù)開發(fā)高附加值產(chǎn)品，進(jìn)一步提高動(dòng)物血液的利用率，對(duì)動(dòng)物血液制品的工業(yè)化和生態(tài)環(huán)境的保護(hù)具有重要的意義。本研究以牛血血紅蛋白為研究對(duì)象，研究中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、木瓜復(fù)合蛋白酶、Protamex蛋白酶、Fla

2、vourzyme蛋白酶單酶體系對(duì)血紅蛋白的酶水解作用，并采用內(nèi)切酶和外切酶分步酶解方法，確定水解血紅蛋白的最佳條件，通過測(cè)定水解度、蛋白質(zhì)回收率、氨基氮含量、TCA可溶性氮含量、血紅素含量等指標(biāo)，確定最佳的酶解工藝條件，為血紅蛋白制品的開發(fā)和工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。并利用體外抗氧化活性測(cè)定方法對(duì)酶解產(chǎn)物的抗氧化活性進(jìn)行檢測(cè)，探索利用動(dòng)物血液血紅蛋白提取抗氧化肽的可行性，為動(dòng)物血液制品的開發(fā)利用探索新的道路。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)牛血血紅蛋白進(jìn)

3、行酶法水解，以水解度(DH)和TCA可溶性氮含量為指標(biāo)，中性蛋白酶水解效果最好；以蛋白回收率、血紅素含量作為衡量指標(biāo)，木瓜復(fù)合蛋白酶效果最好。通過單因素水平試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)，確定了中性蛋白酶的最佳水解條件、中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的雙酶復(fù)合酶解最佳工藝和木瓜復(fù)合蛋白酶分段升溫酶解最佳工藝。實(shí)驗(yàn)證明采用雙酶復(fù)合酶解血紅蛋白效果明顯好于單酶酶解，水解液的水解度、蛋白質(zhì)回收率、氨基氮含量、TCA可溶性氮含量都有所增加，水解度可達(dá)到52.9％，比單

4、酶水解提高了55％，水解液中TCA可溶性氮含量為70.6％。 通過SDS-PAGE電泳研究血紅蛋白酶解產(chǎn)物的分子量分布，探討酶的種類，水解方式對(duì)酶解產(chǎn)物分子量分布的影響。結(jié)果顯示，雙酶分步酶解所得水解液中多肽平均分子量明顯小于單酶水解液，單酶水解液中多肽分子量集中在3000～8000Da，雙酶復(fù)合水解液中大部分多肽分子量低于6000Da，部分多肽分子量在3000Da以下。 本研究采用熒光光度法檢測(cè)了酶解產(chǎn)物抗氧化活性，發(fā)