抗IL-6單克隆抗體對(duì)自身免疫性心肌炎的保護(hù)作用研究.pdf

1、青年人的心衰可由擴(kuò)張性心肌病引起,病毒性心肌炎反復(fù)發(fā)生、遷延不愈是擴(kuò)張型心肌病的常見(jiàn)病因。病毒性心肌炎在青少年中的患病率為8.03萬(wàn)/10萬(wàn)~41.86/10萬(wàn)。心肌炎的發(fā)病機(jī)制包括病毒的直接作用和機(jī)體的自身免疫反應(yīng)。病毒的直接作用發(fā)生較早,進(jìn)展迅速;由自身免疫所致的損傷較病毒直接損傷發(fā)生時(shí)間晚,持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。包括自身反應(yīng)性殺傷性T細(xì)胞、自身反應(yīng)性抗體(HRA)、細(xì)胞因子介導(dǎo)的心肌損傷。利用豬心肌肌凝蛋白,可在易感動(dòng)物L(fēng)ewis大鼠上制造

2、自身免疫心肌炎(Experimental autoimmune myocarditis, EAM)模型,能夠很好的模擬人類病毒性心肌炎所致的自身免疫損傷,基于EAM大鼠的實(shí)驗(yàn)研究為反復(fù)感染的心肌炎所致擴(kuò)心病提供了理論依據(jù)。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外研究顯示,Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞數(shù)量和功能上的平衡失調(diào)在自身免疫性疾病的發(fā)展過(guò)程中起到了一定的作用[1、2],而IL-6在Th17/Treg平衡重起到了決定平衡方向的關(guān)鍵作用。
　　研究目的：<

3、br>　　1.觀察白介素6單克隆抗體(IL-6 mAb)對(duì)大鼠自身免疫心肌炎(EAM)的干預(yù)療效。
　　2.探討白介素(interleukin,IL)-6在EAM發(fā)急性發(fā)病以及慢性持續(xù)過(guò)程中,對(duì)輔助性T細(xì)胞17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Th17/Treg)平衡的影響。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　本研究通過(guò)對(duì)EAM大鼠以及經(jīng)抗IL-6單克隆抗體干預(yù)的EAM大鼠進(jìn)行心肌組織病理觀察,檢測(cè)兩組大鼠脾細(xì)胞中Th17細(xì)胞、CD4+CD25+Tr

4、eg細(xì)胞數(shù)量和功能,測(cè)定血清細(xì)胞因子,檢測(cè)經(jīng) IL-6mAb刺激后的脾細(xì)胞中細(xì)胞因子分泌水平的變化,以及目的基因在疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中mRNA水平的變化等。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　炎癥積分、纖維化積分、凋亡指數(shù) IL-6mAb干預(yù)組較 EAM組明顯下降(P<0.01)。
　　急性峰值期(21d組):EAM組Th17和Treg細(xì)胞數(shù)量上調(diào),IL-6mAb干預(yù)組則受明顯抑制(P<0.01);
　　血清炎癥因子分泌情況:⑴

5、急性炎癥期:EAM組IL-6、IL-17和TGF-β的濃度升高,IL-6mAb干預(yù)組則明顯下降(P<0.01);⑵慢性持續(xù)期:EAM組IL-17水平升高,IL-10、Treg水平降低;IL-6mAb干預(yù)組則與正常組無(wú)差異。
　　體外IL-6mAb刺激EAM源性脾細(xì)胞,培養(yǎng)基中IL-10、IL-17和TGF-β的水平較IgG刺激組明顯降低。
　　外周血轉(zhuǎn)錄因子STAT3、RORγt、Foxp3 mRNA水平:急性炎癥期STAT

6、3、RORγt、Foxp3 mRNA水平上升,IL-6mAb干預(yù)組外周血STAT3、RORγt、FoxP3 mRNA水平下降(P<0.01);慢性持續(xù)期:EAM組,STAT3、RORγt mRNA水平較正常組升高,FoxP3 mRNA水平降低。IL-6mAb干預(yù)組則無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：
　　1.抗IL-6單克隆抗體對(duì)大鼠自身免疫性心肌炎具有保護(hù)作用;
　　2. Th17、Treg細(xì)胞參與EAM急性發(fā)病過(guò)程;Th17