抗TCRαβ單克隆抗體對類風濕關(guān)節(jié)炎防治作用的實驗研究.pdf

1、第一部分 DBA/1小鼠膠原性關(guān)節(jié)CIA模型的建立目的建立膠原誘發(fā)關(guān)節(jié)炎(IA)的DBA/1小鼠模型，對其發(fā)病特點、臨床特征及病理學變化分別予以分析，為相關(guān)藥物療效評價提供合適模型。 方法 1、將牛Ⅱ型膠原與等體積的完全弗氏佐劑充分乳化，在DBA/1小鼠尾根部2-3cm處皮內(nèi)注射100μl混合乳劑，3周后再重復注射等量乳劑。 2、觀測不同時間點小鼠的癥狀表現(xiàn)，如發(fā)病率、腫脹程度、炎癥指數(shù)和體重等變化。 3

2、、對中晚期發(fā)病關(guān)節(jié)進行組織病理學檢測和X線放射學檢查。 結(jié)果 1、在首次免疫后28d，膠原注射小鼠后足踝關(guān)節(jié)開始出現(xiàn)明顯紅斑，腫脹，體重下降，行動不便，39d腫脹厚度達到最高，隨后逐漸消退，53d后(即再次免疫后32d時)到達較低值，呈時間依賴方式，嚴重的出現(xiàn)關(guān)節(jié)畸形，正常組無上述癥狀。 2、所有接種CⅡ和CFA的小鼠均發(fā)生了多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，CIA模型組小鼠的CIA發(fā)生率為100％。 3、病理學結(jié)果顯示，患

3、病關(guān)節(jié)表現(xiàn)為周圍炎性細胞浸潤、滑膜增生、軟骨和骨骼破壞等較為典型的RA變化；正常對照組小鼠均無上述表現(xiàn)。X線放射學檢查顯示關(guān)節(jié)面不光滑，軟組織明顯水腫。 結(jié)論 采用DBA/1小鼠，通過皮下注射Ⅱ型膠原乳劑可成功誘導CIA模型，而且發(fā)生率為100％，該模型在發(fā)病特點、組織病理學改變及X線放射學檢查等方面，較充分模擬了人類RA的病變特征，適用于開展RA防治藥物或其機制的實驗研究。 第二部分抗TCRαβ單克隆抗體對小鼠

4、膠原性關(guān)節(jié)炎的抑制作用 目的 通過膠原誘導類風濕關(guān)節(jié)炎動物模型，從不同時間點的癥狀表現(xiàn)、發(fā)病特點及病理學角度，研究抗TCRαβ單克隆抗體對類風濕關(guān)節(jié)炎的治療作用，探討抗TCR αβ單克隆抗體防治類風濕性關(guān)節(jié)炎的可行性和機制，對其藥理作用和機制作初步探討。 方法 選用DBA/1小鼠為實驗動物，尾根部皮內(nèi)注射牛Ⅱ型膠原與完全弗氏佐劑混合劑建立CIA關(guān)節(jié)炎動物模型，分別使用抗TCRαβ單克隆抗體和地塞米松給藥進

5、行治療。通過臨床指標和病理學檢驗結(jié)果等比較觀察各組對膠原誘導的類風濕關(guān)節(jié)炎模型的影響。 結(jié)果 抗TCRαβ單克隆抗體組對膠原性關(guān)節(jié)炎小鼠關(guān)節(jié)腫脹具有抑制作用，明顯改善小鼠的全身癥狀。與CIA模型組比較，經(jīng)過單克隆抗體給藥，可顯著降低炎癥指數(shù)和腫脹厚度，體重變化趨勢不大，P<0.05為顯著性水平，單克隆抗體組相對地塞米松組發(fā)病緩慢，癥狀減輕。病理學方面其作用明顯，滑膜組織充血水腫明顯改善，明顯抑制炎性細胞浸潤和血管翳形成。

6、 結(jié)論 膠原性關(guān)節(jié)炎動物模型是廣泛用于類風濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制的研究和針對治療靶點公認的動物模型。實驗結(jié)果表明抗TCRαβ單克隆抗體對小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎CIA模型有明顯抑制作用，抗炎作用良好。對類風濕關(guān)節(jié)炎的防治具有積極意義。 第三部分抗TCRαβ單克隆抗體治療類風濕關(guān)節(jié)炎的機制探討 目的 建立類似類風濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生機制的DBA/1小鼠Ⅱ型膠原誘導的動物模型，觀察抗TCRαβ單克隆抗體對Ⅱ型膠原誘導的小鼠

7、關(guān)節(jié)炎模型的治療中血清IFN-γ、TNF-α和IL-4細胞因子表達的影響，從免疫學角度，探討TCRαβ單克隆抗體防治類風濕關(guān)節(jié)炎的可能作用機制。 方法 以Ⅱ型膠原誘導的小鼠關(guān)節(jié)炎作為模型，單克隆抗體、地塞米松腹腔內(nèi)注射治療CIA模型。通過Luminex200液晶芯片分析平臺鑒定微球的顏色來確定反應類型，而對反應的定量分析，測定血清細胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-4的含量。 結(jié)果 Luminex200檢測結(jié)果

8、顯示：與正常對照組比較，CIA小鼠血清中TNF-α、IFN-γ水平有顯著性差異，抗TCR αβ單抗組能抑制CIA小鼠血清TNF-α、IFN-γ水平，表明炎性因子在CIA過程中的變化。 結(jié)論 細胞因子參與了Ⅱ型膠原誘導的類風濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)炎癥過程，在單克隆抗體防治作用中扮演重要角色?？筎CR αβ單克隆抗體有明顯的治療作用，機理包括影響關(guān)節(jié)局部細胞因子，其機制可能與降低炎性因子的表達，調(diào)節(jié)異常免疫功能有關(guān)，減輕炎癥損傷，對類