Siltuximab單克隆抗體對(duì)卵巢癌中IL-6介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響.pdf

1、研究背景:卵巢癌(ovarian cancer)是嚴(yán)重危害婦女健康的三大惡性腫瘤之一，其發(fā)生率居第3位，但死亡率占據(jù)首位。據(jù)統(tǒng)計(jì)，近年來(lái)在我國(guó)其發(fā)病率有明顯上升趨勢(shì)。在美國(guó)每年大約有26，000例上皮性卵巢癌被確診，有超過1.6萬(wàn)婦女死于這一疾病。卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)化療方法是紫杉醇(paclitaxel)和卡鉑(carboplatin)的聯(lián)合化療。不幸的是，由于多藥耐藥的出現(xiàn)限制了這兩種藥物的療效。多藥耐藥可能是由于細(xì)胞膜糖蛋白P-gp的過度

2、表達(dá)，也可能是這些藥物改變了特定的藥物結(jié)合蛋白位點(diǎn)(如紫杉醇連接位點(diǎn)的微管蛋白突變)，或者是細(xì)胞凋亡閾值的改變。因此，為使用降低凋亡閾值的治療策略提供了一種潛在的治療方法來(lái)扭轉(zhuǎn)或防止多藥耐藥情況的發(fā)生。
　　 白細(xì)胞介素6(IL-6)最初被認(rèn)為是一種非特異性B細(xì)胞分化因子，誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生免疫活性。隨后，IL-6被認(rèn)為是一種多效性細(xì)胞因子，在各種細(xì)胞(包括腫瘤細(xì)胞)中有著廣泛的生物學(xué)活性。IL-6通過激活幾個(gè)靶基因而參與腫瘤細(xì)胞的

3、分化、生存、凋亡和增殖。IL-6的抗凋亡作用與BcL-2家族蛋白的表達(dá)有關(guān)，例如：在骨髓瘤細(xì)胞株和患者的骨髓瘤細(xì)胞中，疾病的發(fā)展與Bcl-XL蛋白上調(diào)和血清IL-6水平增加有關(guān)。IL-6也與乳腺癌、前列腺癌和卵巢癌的腫瘤生物學(xué)行為有關(guān)。藥物敏感的乳腺癌細(xì)胞中沒有IL-6的表達(dá)，而多藥耐藥的乳腺癌細(xì)胞則產(chǎn)生高水平的IL-6，這表明IL-6的自分泌與多藥耐藥有關(guān)。更多的證據(jù)表明，IL-6是一種自分泌和旁分泌生長(zhǎng)因子，在前列腺癌細(xì)胞株中可能為

4、順鉑細(xì)胞毒性的抑制因子。同樣，體外實(shí)驗(yàn)表明：對(duì)于耐順鉑的腎癌細(xì)胞株，順鉑與抗IL-6或抗IL-6受體(IL-6R)抗體聯(lián)合治療扭轉(zhuǎn)了對(duì)順鉑的耐藥。在卵巢癌病人血清中，IL-6以高水平表達(dá)，且IL-6的高表達(dá)也已經(jīng)在人類卵巢癌模型中被觀察到。對(duì)于卵巢癌來(lái)說，盡管IL-6作為一個(gè)腫瘤標(biāo)志物較CA125缺少敏感性，但其產(chǎn)生可能與腫瘤的侵襲和預(yù)后有關(guān)。具體來(lái)說，IL-6水平高的患者比正常或低IL-6水平的患者生存期縮短。此外，最近的證據(jù)表明，調(diào)

5、節(jié)IL-6信號(hào)傳導(dǎo)通路的治療策略可能直接影響細(xì)胞對(duì)順鉑和阿霉素的耐藥。例如：外源性IL-6的治療導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒性藥物(包括阿霉素、VP-16和順鉑)產(chǎn)生耐藥并抑制這些藥物所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。相反，通過反義寡核苷酸來(lái)阻斷IL-6可使腫瘤細(xì)胞對(duì)這些藥物敏感。此外，我們及其它實(shí)驗(yàn)室的研究也顯示，IL-6產(chǎn)物在卵巢癌耐藥細(xì)胞株中及在卵巢癌病人的血清和腹水中增加。這些數(shù)據(jù)強(qiáng)有力的支持這個(gè)理論，即：IL-6是臨床上一種有效的、重要的抗凋亡基因和

6、耐藥調(diào)節(jié)因子。
　　 抗IL-6單克隆抗體-siltuximab(CNTO328)是一種化學(xué)鼠抗人IL-6單克隆抗體，可中和IL-6的功能，其作用已在不同類型的人類癌癥中得到研究。它也被用于臨床試驗(yàn)中，且被癌癥病人所接受。在這項(xiàng)研究中，研究了siltuximab對(duì)紫杉醇耐藥的卵巢癌細(xì)胞株中IL-6信號(hào)傳導(dǎo)通路及IL-6介導(dǎo)的基因表達(dá)的影響。這項(xiàng)研究對(duì)siltuximab和紫杉醇聯(lián)合治療卵巢癌提供了更多的證據(jù)。
　　 研究

7、目的:
　　 1、通過研究IL-6在卵巢癌組織中的表達(dá)，了解IL-6信號(hào)傳導(dǎo)通路的表達(dá)激活是否與卵巢癌病人的分期、臨床預(yù)后及疾病的轉(zhuǎn)歸有關(guān)；
　　 2、通過研究siltuximab單克隆抗體對(duì)卵巢癌耐藥細(xì)胞株中IL-6介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路及其基因表達(dá)的影響，探討IL-6信號(hào)傳導(dǎo)通路的阻斷對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡及其耐藥的分子生物學(xué)機(jī)制；
　　 3、通過研究siltuximab單克隆抗體對(duì)體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響及與紫杉醇的

8、協(xié)同作用，為臨床制定靶向阻斷IL-6信號(hào)傳導(dǎo)通路，治療卵巢癌的新策略提供生物學(xué)依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 1、標(biāo)本來(lái)源
　　 選取美國(guó)哈佛大學(xué)麻省總醫(yī)院近20年來(lái)確診為卵巢癌的26例患者的癌組織標(biāo)本，每例患者的標(biāo)本均包含原發(fā)性、轉(zhuǎn)移性和復(fù)發(fā)性癌組織。
　　 2、細(xì)胞株
　　 在這項(xiàng)研究中使用的人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3和CAOV3均購(gòu)自美國(guó)微生物菌種保藏中心(ATCC)。紫杉醇耐藥卵巢癌細(xì)胞株

9、SKOV3/TR和CAOV3/TR由美國(guó)哈佛大學(xué)麻省總醫(yī)院腫瘤研究中心提供，建株過程如下：把敏感細(xì)胞株培養(yǎng)在含有紫杉醇的培養(yǎng)基中，通過逐步提高紫杉醇的含量經(jīng)過8個(gè)月的培養(yǎng)而獲得。
　　 3、主要試劑和儀器兔抗Bcl-XL和MCL-1多克隆抗體、鼠抗磷酸化Stat3(pStat3)和survivin單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technlogies公司，鼠抗actin和MTT單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，

10、抗IL-6單克隆抗體siltuximab和非特異性F105抗體是由美國(guó)Centocor公司生產(chǎn)。紫杉醇由麻省總醫(yī)院提供。EMipseTi-U免疫熒光顯微鏡購(gòu)自日本尼康公司，多功能酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)MD公司。
　　 4、實(shí)驗(yàn)方法
　　 4.1細(xì)胞培養(yǎng)研究：使用的人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3和CAOV3、紫杉醇耐藥卵巢癌細(xì)胞株SKOV3/TR和CAOV3/TR分別培養(yǎng)于含10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素的

11、RPMI1640培養(yǎng)基中，置37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中，每2～3天傳代一次。SKOV3/TR和CAOV3/TR細(xì)胞定期培養(yǎng)于含有0.2μmol/l紫杉醇的培養(yǎng)基中，以確認(rèn)其多藥耐藥性。用支原體檢測(cè)試劑盒定期檢測(cè)所有細(xì)胞，以確保其沒有被支原體污染。
　　 4.2免疫組化法檢測(cè)：卵巢癌患者癌組織中IL-6蛋白的表達(dá)情況26例卵巢癌患者的癌組織標(biāo)本(每例患者均包含原發(fā)性、轉(zhuǎn)移性和復(fù)發(fā)性癌組織)，由美國(guó)哈佛大學(xué)Danao-Farber

12、/Harvard癌癥中心制成組織芯片。取厚度為5μm的組織切片，在60℃恒溫箱中烘烤2 h；二甲苯脫蠟15min，100％乙醇浸泡5min，95％和70％7，醇中各浸泡5 min使再水化，3％過氧化氫甲醇孵育10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，抗原修復(fù)液修復(fù)抗原；常溫下磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.5)沖洗3次，在含5％山羊血清和1％胎牛血清的PBS中孵育1 h以封閉蛋白。IL-6抗體用含1％胎牛血清和5％山羊血清的溶液按1:1

13、00稀釋，4℃過夜；PBS漂洗3次，每次2 min。用免疫組化抗生物素蛋白-生物素復(fù)合物(ABC)法檢測(cè)結(jié)合抗體，二甲基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素復(fù)染。IL-6蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)，IL-6蛋白的表達(dá)強(qiáng)度根據(jù)染色深度分為4級(jí)：無(wú)染色者為陰性(-)、淺黃色者為弱陽(yáng)性(1+)、棕黃色者為中等度陽(yáng)性(2+)、棕褐色者為強(qiáng)陽(yáng)性(3+)。1+～3+為IL-6蛋白陽(yáng)性標(biāo)本，以此計(jì)算陽(yáng)性表達(dá)率。
　　 4.3蛋白印跡法檢測(cè)：IL-6處理后SKO

14、V3細(xì)胞中pStat3蛋白的表達(dá)情況將SKOV3細(xì)胞和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pEGFP-Stat3融合蛋白的腎細(xì)胞株BHK-pEGFP-Stat3細(xì)胞培養(yǎng)24h，加入30ng/ml的IL-6處理1 h，以未經(jīng)過任何處理的細(xì)胞作為空白對(duì)照，收獲細(xì)胞，洗滌，在1×蛋白裂解液(RIPA)中溶解；采用蛋白印跡法檢測(cè)細(xì)胞中pStat3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度，以β肌動(dòng)蛋白(β-actin)為內(nèi)對(duì)照。
　　 4.4蛋白印跡法檢測(cè)：IL-6聯(lián)合siltuximab處

15、理后SKOV3細(xì)胞中pStat3蛋白的表達(dá)情況將SKOV3細(xì)胞以每孔2000個(gè)細(xì)胞接種于6孔板中，過夜。用IL-6(30 ng/ml)或不同濃度siltuximab(分別為0.01、0.1、1、10μg/ml)聯(lián)合IL-6(30 ng/ml)處理1 h，以未經(jīng)過任何處理的細(xì)胞作為空白對(duì)照；收獲細(xì)胞，洗滌，溶解于1×RIPA中；采用蛋白印跡法檢測(cè)SKOV3細(xì)胞中pStat3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度，以β-actin為內(nèi)對(duì)照。
　　 4.5蛋

16、白印跡法檢測(cè)：siltuximab處理后SKOV3/TR和CAOV3/TR細(xì)胞中Stat3介導(dǎo)的抗凋亡蛋白的表達(dá)情況SKOV3/TR和CAOV3/TR細(xì)胞用濃度分別為0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml的siltuximab處理，過夜，以未經(jīng)siltuximab處理的細(xì)胞為空白對(duì)照；用1×RIPA溶解，收獲細(xì)胞，洗滌；采用蛋白印跡法檢測(cè)SKOV3/TR和CAOV3/TR細(xì)胞中抗凋亡蛋白--Bcl-XL、MCL-1、survi

17、vin蛋白的表達(dá)，以β-actin為內(nèi)對(duì)照。
　　 4.6實(shí)時(shí)熒光技術(shù)分析：siltuximab聯(lián)合IL-6處理后SKOV3細(xì)胞中pEGFP-Stat3融合蛋白的核轉(zhuǎn)移情況使用脂質(zhì)體lipofectmine，通過轉(zhuǎn)染的方法建立穩(wěn)定表達(dá)pEGFP-Stat3融合蛋白的腎細(xì)胞株BHK-pEGFP-Stat3和卵巢癌細(xì)胞株SKOV3-pEGFP-Stat3，將BHK-pEGFP-Stat3和SKOV3-pEGFP-Stat3細(xì)胞分別接

18、種于96孔培養(yǎng)板中，每孔接種4000個(gè)細(xì)胞，37℃培養(yǎng)過夜，分別用0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml的siltuximab處理4 h，再加入IL-6(30 ng/ml)處理1 h，以未經(jīng)siltuximab處理的細(xì)胞為對(duì)照。用EclipseTi-U免疫熒光顯微鏡觀察pEGFP-Stat3融合蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)部位。
　　 4.7四甲基偶氮唑藍(lán)比色法檢測(cè)：siltuximab處理后SKOV3/TR和CAOV3/TR細(xì)

19、胞對(duì)紫杉醇的敏感性將SKOV3/TR和CAOV3/TR細(xì)胞用含10％胎牛血清、100 U/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素的RPM11604培養(yǎng)液配成單細(xì)胞懸液，以每孔2000個(gè)細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，加入不同濃度的siltuximab(分別為1、10μg/ml)和紫杉醇(濃度分別為1×10-6、1×10-5、1×104、1×10-3、1×10-2、1×10-1、1μmol/l，培養(yǎng)96 h，每孔加入10μl的四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT

20、，5 mg/ml)溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。置多功能酶標(biāo)儀于490 mn波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度(A)值。使用GrapHPad PRISM4軟件繪制反應(yīng)曲線。當(dāng)A490降至50％時(shí)的紫杉醇濃度即為50％抑制濃度(IC50)，以此表示紫杉醇的敏感性，IC50越小表示對(duì)紫杉醇越敏感。
　　 4.8基因表達(dá)和分析：卵巢癌細(xì)胞株SKOV3和CAOV3種在100 mm的細(xì)胞培養(yǎng)板中過夜。然后加入IL-6(30 ng/ml)孵育1 h或細(xì)胞預(yù)先用si

21、ltuximab處理4 h后，再加IL-6處理1h。然后用TRIzol()Reagent收集細(xì)胞總的RNA。溴化乙錠染色，瓊脂糖/甲醛凝膠鑒定RNA的質(zhì)量?？俁NA采用Affymetrix Genechip U133 Plus2.0 arrays，在哈佛醫(yī)學(xué)院的基因排列技術(shù)中心測(cè)定基因的表達(dá)(http：//genome.med.harvard.edu)。該陣列含有超過47.000個(gè)轉(zhuǎn)錄本的人類基因。通過測(cè)量每個(gè)基因?qū)?3-mers的寡核

22、苷酸序列雜交得到mRNA的表達(dá)水平。使用GeneSifter軟件分析微陣列的數(shù)據(jù)。(http：//www.genesifter.net/web/)。
　　 4.9 TaqMan逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(TaqMan RT-PCR)進(jìn)一步測(cè)定基因的差異性表達(dá)：為了測(cè)定基因表達(dá)，從總RNA樣本中，使用特殊的oligo(dT)寡核苷酸引物反轉(zhuǎn)錄提取cDNA。產(chǎn)生的cDNA再通過PCR擴(kuò)增。采用TaqMan UGT284(NM_021139)

23、，ATP282(X63575)和β-actin基因作為對(duì)照，使用TaqMan UniversalPCR Master Mix和StepOnePlus RT-PCR系統(tǒng)進(jìn)行分析。通過與actin基因表達(dá)相比較獲得相對(duì)的基因表達(dá)水平。PCR反應(yīng)體系包含TaqMan human UGT284或ATP282和β-actin探針，總體積為20μl。反應(yīng)體系如下：95℃10 min，95℃(15 s)40 cycles和退火/延伸60℃(1 min

24、)。所有的反應(yīng)均進(jìn)行三次。
　　 4.10測(cè)定siltuximab對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及紫杉醇敏感性的影響：選用3～4周左右的雌性裸小鼠36只，用于建立紫杉醇耐藥卵巢癌細(xì)胞株的移植瘤小鼠模型。在移植瘤模型中，為了測(cè)定siltuximab對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及對(duì)紫杉醇敏感性的影響，第一天用5×106 SKOV3/TR和基質(zhì)膠的混懸液做裸小鼠皮下注射，注射2周后，小鼠被分成6組。第1組用生理鹽水腹腔注射，第2組用非特異性抗體F105(20 mg/k

25、g)腹腔注射，第3組用siltuximab(20 mg/kg)腹腔注射，第4組用紫杉醇(20 mg/kg)腹腔注射，第5組用紫杉醇(20 mg/kg)和siltuximab(20 mg/kg)作混合腹腔注射。最后一組用紫杉醇(20 mg/kg)和非特異性抗體F105(20 mg/kg)混合腹腔注射。所有的6組小鼠，每周要治療兩次，持續(xù)5周。每天檢查小鼠健康狀況和腫瘤生長(zhǎng)情況。用電子數(shù)字卡尺(游標(biāo)卡尺)每周測(cè)量?jī)纱文[瘤的大小。腫瘤體積(m

26、m3)=(W2×L)/2，其中W為腫瘤寬度，L為腫瘤長(zhǎng)度。
　　 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，計(jì)量資料的多個(gè)樣本均數(shù)比較應(yīng)用單因素方差分析，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1、IL-6在轉(zhuǎn)移性和復(fù)發(fā)性。卵巢癌中呈高表達(dá)轉(zhuǎn)移性和復(fù)發(fā)性癌組織中IL-6的陽(yáng)性表達(dá)率分別為69％(18/

27、26)和77％(20/26)，原發(fā)性癌組織中IL-6的陽(yáng)性表達(dá)率為23％(6/26)。卵巢癌患者轉(zhuǎn)移性和復(fù)發(fā)性癌組織中IL-6蛋白的染色強(qiáng)度明顯高于原發(fā)性癌組織。
　　 2、IL-6處理后SKOV3細(xì)胞中pStat3蛋白表達(dá)增強(qiáng)。IL-6處理的SKOV3細(xì)胞中pStat3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度為0.469±0.115，未經(jīng)IL-6處理的SKOV3細(xì)胞中pStat3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度為0.144±0.103，經(jīng)IL-6處理組明顯高于未經(jīng)IL-

28、6處理。
　　 3、Siltuximab聯(lián)合IL-6處理后SKOV3細(xì)胞中pStat3蛋白的表達(dá)明顯下降。SKOV3細(xì)胞經(jīng)IL-6處理后，細(xì)胞中pStat3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度(0.525±0.139)明顯高于空白對(duì)照組(0.106±0.091)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Siltuximab(濃度分別為0.01、0.1、1和10μg/ml)聯(lián)合IL-6處理后，SKOV3細(xì)胞中pStat3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.509±0.112、0.20

29、4±0.158、0.138±0.103、0.056±0.057，隨siltuximab濃度的增加逐漸下降，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4、Siltuximab處理后SKOV3/TR和CAOV3/TR細(xì)胞中Bcl-XL、MCL-1、survivin蛋白的表達(dá)明顯降低。SKOV3/TR細(xì)胞經(jīng)不同濃度的siltuximab處理后，細(xì)胞中Bcl-XL、MCL-1、survivin蛋白的表達(dá)強(qiáng)度均明顯低于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

30、；而Stat3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)明顯變化，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 CAOV3/TR細(xì)胞經(jīng)不同濃度的siltuximab處理后，細(xì)胞中Bcl-XL、MCL-1、survivin蛋白的表達(dá)強(qiáng)度均明顯低于空白對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而Stat3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)明顯變化，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5、Siltuximab抑制Stat3蛋白的核轉(zhuǎn)移。未經(jīng)處理的SKOV3-pEGFP-Stat3細(xì)胞中，大部分pE

31、GFP-Stat3融合蛋白位于細(xì)胞質(zhì)中；IL-6處理后，pEGFP-Stat3融合蛋白迅速轉(zhuǎn)移到SKOV3-pEGFP-Stat3細(xì)胞的細(xì)胞核中；siltuximab聯(lián)合IL-6處理后，pEGFP-Stat3融合蛋白的核轉(zhuǎn)移隨siltuximab濃度的增加逐漸減少。在BHKpEGFP-Stat3細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)類似的結(jié)果。
　　 6、Siltuximab增加了SKOV3/TR和CAOV3/TR細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性。SKOV3/TR細(xì)

32、胞經(jīng)不同濃度的siltuximab(分別為1、10μg/ml)處理后，細(xì)胞對(duì)紫杉醇的IC50(分別為0.49和0.19μg/ml)明顯低于未經(jīng)siltuximab處理者；CAOV3/TR細(xì)胞經(jīng)不同濃度的siltuximab處理后，細(xì)胞對(duì)紫杉醇的IC50(分別為0.0010和0.0008μg/ml)明顯低于未經(jīng)siltuximab處理者。
　　 7、IL-6處理后卵巢癌細(xì)胞中不同的表達(dá)基因。卵巢癌細(xì)胞株SKOV3和CAOV3經(jīng)IL

33、-6處理后許多基因的表達(dá)水平發(fā)生了改變，其中有506(SKOV3/IL-6)和674(CAOV3/IL-6)個(gè)基因上調(diào)，有1002(SKOV3/IL-6)和1148(CAOV3/IL-6)個(gè)基因降調(diào)。Venn diagram顯示：27個(gè)基因在SKOV3/IL-6和CAOV3/IL-6細(xì)胞株中均表現(xiàn)出10倍上調(diào)，54個(gè)基因均表現(xiàn)出10倍降調(diào)。
　　 8、Siltuximab處理后IL-6介導(dǎo)的基因表達(dá)減弱。通過比較單用IL-6處理

34、和siltuximab與IL-6聯(lián)合處理的細(xì)胞株的基因表達(dá)圖譜，發(fā)現(xiàn)經(jīng)siltuximab處理后許多IL-6介導(dǎo)的基因的表達(dá)減弱，分別有634(SKOV3/IL-6/siltuximab)和679(CAOV3/IL-6/siltuximab)個(gè)基因出現(xiàn)10倍降調(diào)，31個(gè)基因在兩種細(xì)胞中均表現(xiàn)出10倍降調(diào)。
　　 9、TaqMan RT-PCR證實(shí)了基因的差異性表達(dá)。選擇UGT284(nm_021139)和ATP282(x6357

35、5)兩個(gè)在SKOV3/IL-6和CAOV3/IL-6細(xì)胞株中均過度表達(dá)的基因，評(píng)估基因的差異表達(dá)。TaqMan RT-PCR結(jié)果顯示，經(jīng)siltuximab處理后，IL-6介導(dǎo)的兩個(gè)基因--UGT284(nm_021139)和ATP2B2(x63575)的表達(dá)均減弱。
　　 10、Siltuximab單獨(dú)或與紫杉醇聯(lián)合治療對(duì)體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)均無(wú)顯著影響。Siltuximab治療組與F105對(duì)照組腫瘤的生長(zhǎng)無(wú)明顯差別，體積大小的比較

36、差異無(wú)顯著性。Siltuximab和紫杉醇聯(lián)合治療組移植瘤無(wú)明顯縮小，與其它單個(gè)用藥相比腫瘤體積大小無(wú)顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.IL-6與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展及耐藥性密切相關(guān)，IL-6是治療卵巢癌的重要靶點(diǎn)。
　　 2.Siltuximab可有效阻斷卵巢癌中的IL-6信號(hào)傳導(dǎo)通路和IL-6介導(dǎo)的基因表達(dá)，具有巨大的應(yīng)用潛力。
　　 3.IL-6的信號(hào)傳導(dǎo)通路的阻斷可能對(duì)卵巢癌的治療有重要作用，但