莪術(shù)油誘導(dǎo)卵巢癌上皮細(xì)胞系調(diào)亡及其對(duì)STAT信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的:卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其死亡率據(jù)婦科惡性腫瘤之首。由于其起病隱匿且缺乏早期診斷手段，大多數(shù)患者初次就診時(shí)已發(fā)展為卵巢癌晚期，甚至廣泛轉(zhuǎn)移，手術(shù)已不能完全去除，目前，腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)及術(shù)后聯(lián)合化療是目前公認(rèn)的治療方法。以順鉑為基礎(chǔ)的化療是治療卵巢癌的常用藥物，但在治療過(guò)程中約80％患者表現(xiàn)出不同程度的獲得性耐藥，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后[1-2]。因此，如何利用新的敏感的藥物設(shè)計(jì)出抗腫瘤活性最佳，而毒性及耐藥性最小的聯(lián)合

2、化療方案，進(jìn)而提高卵巢癌患者的生存率和生活質(zhì)量，是我們深入研究的重點(diǎn)。
　　 莪術(shù)油是從姜科植物莪術(shù)的干燥根莖中提取的揮發(fā)油成分。莪術(shù)中富含揮發(fā)油，且成分相當(dāng)復(fù)雜，主要化學(xué)成分為β-欖香烯、莪術(shù)醇、莪術(shù)酮、新莪術(shù)二酮、樟腦等[3]。其具有很好的抗腫瘤、抗病毒、抗炎、抗血栓形成和調(diào)節(jié)免疫功能等[4-6]廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，尤其是其抗腫瘤作用受到廣泛關(guān)注。有研究證實(shí)，莪術(shù)油對(duì)胃癌，肝癌，宮頸癌，子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞等有抑制作用，但莪術(shù)油對(duì)化

3、療耐藥的卵巢癌是否有作用目前尚未見(jiàn)報(bào)道。研究認(rèn)為STAT3信號(hào)傳導(dǎo)通路及其調(diào)控的下游靶基因可以作為腫瘤對(duì)化療耐藥的標(biāo)志[7-9]。
　　 本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)將莪術(shù)油作用于人卵巢癌上皮細(xì)胞SKOV3和卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP觀察其對(duì)細(xì)胞增殖的影響，是否可逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性，并初步探討其對(duì)STAT信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響，為耐藥性卵巢癌的臨床治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:(1)細(xì)胞培養(yǎng):體

4、外培養(yǎng)人卵巢癌上皮細(xì)胞SKOV3和卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP24小時(shí)后，加入不同濃度的莪術(shù)油，采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、HE染色法觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。(2)分別加用16、32、64、128、256ug/ml莪術(shù)油作用于卵巢癌細(xì)胞SKOV3和SKOV3/DDP，同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組，培養(yǎng)24，48小時(shí)后，利用噻唑藍(lán)比色法(MTT)法檢測(cè)不同濃度莪術(shù)油對(duì)細(xì)胞SKOV3及SKOV3/DDP增殖抑制情況。(3)順鉑，莪術(shù)油及其聯(lián)合應(yīng)用于SK

5、OV3/DDP24小時(shí)，利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞信號(hào)通路中STAT3及Survivin、Caspase-3、VEGFCmRNA蛋白的表達(dá)變化情況。(4)半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法測(cè)定STAT3及其轉(zhuǎn)錄激活因子Survivin、VEGFC和Caspase-3的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:(1)倒置顯微鏡及HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:對(duì)照組生長(zhǎng)旺盛，形狀規(guī)則，呈梭形;加藥組見(jiàn)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞間隙變大，細(xì)胞體積脹大

6、，顆粒增多，包膜不清。(2)不同濃度莪術(shù)油對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞增殖的影響:隨著藥物濃度和作用時(shí)間的增加，抑制率明顯增高，具有明顯的劑量-時(shí)間效應(yīng)關(guān)系，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。(3)免疫組化法檢測(cè)莪術(shù)油作用于SKOV3/DDP細(xì)胞24h后相關(guān)基因表達(dá)變化情況:STAT3、Survivin、VEGFC表達(dá)下調(diào)、Caspase-3表達(dá)增高(4)RT-PCR測(cè)定顯示:順鉑，莪術(shù)油及其聯(lián)合應(yīng)用順鉑作用于卵巢癌細(xì)

7、胞后STAT3、Survivin、VEGFC吸光度比值下降，Caspase-3吸光度值增高（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:(1)莪術(shù)油對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3，SKOV3/DDP有明顯的增殖抑制作用;(2)莪術(shù)油聯(lián)合順鉑可以協(xié)同誘導(dǎo)SKOV3/DDP凋亡，在凋亡發(fā)生過(guò)程中可能通過(guò)下調(diào)STAT3，Survivin，VEGFC的表達(dá)，上調(diào)凋亡相關(guān)基因Caspase-3蛋白的表達(dá)發(fā)揮作用。(3)STAT3、Survivin蛋白表達(dá)水平與