脫氧土霉素生物可降解支架應(yīng)用于結(jié)腸吻合的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分，HPLC法測定脫氧土霉素生物可降解支架體外釋放率
　　 研究目的：建立測定脫氧土霉素生物可降解支架體外釋放液中藥物濃度的方法(HPLC法)；使用該法明確脫氧土霉素生物可降解支架在體外的藥物釋放模式。
　　 研究方法：將脫氧土霉素生物可降解支架置于105mlPBS液中，每日固定時(shí)間點(diǎn)將釋放介質(zhì)取出50ml作為樣品待檢測，并再加入新鮮的等量的釋放介質(zhì)繼續(xù)釋放實(shí)驗(yàn)，直至釋放終點(diǎn)。HPLC測得樣品中脫氧土霉素含量。色譜

2、條件：流動相：5％乙酸-乙腈-甲醇(55:25:20)，流速為1ml/min，檢測波長為347nm，柱溫為35℃，進(jìn)樣體積10ul，分析時(shí)間lOmin，保留時(shí)間3.9min。
　　 結(jié)果：本法在0.5-4ug/ml間線性良好，相關(guān)系數(shù)0.9862。藥物總釋放量均值為11.595ug。第1天的釋放率即高達(dá)77.24%；第3天的累計(jì)釋放率為87.08%；第7天累計(jì)釋放率已達(dá)97.4%；第13天起停止釋放。
　　 結(jié)論：載藥量

3、為1mg的脫氧土霉素生物可降解支架在體外PBS溶液中釋放模式符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的和預(yù)期。
　　 第二部分，脫氧土霉素生物可降解支架的體外毒性實(shí)驗(yàn)研究
　　 研究目的：觀察脫氧土霉素生物可降解支架在體外對成纖維細(xì)胞的毒性作用。
　　 研究方法：制備脫氧土霉素生物可降解支架72小時(shí)浸提液，體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞48小時(shí)，顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，MTT法進(jìn)行體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)，流式細(xì)胞術(shù)檢測成纖維細(xì)胞周期和凋亡率改變。陰性對照

4、組為純細(xì)胞培養(yǎng)基。
　　 結(jié)果：成纖維細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)后，顯微鏡下觀察浸提液實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞的形態(tài)與結(jié)構(gòu)未發(fā)現(xiàn)明顯改變；MTT法檢測實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞的OD570值較對照組略減低，組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞相對增值率96.5%，細(xì)胞毒性程度Ⅰ級；流式細(xì)胞術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)組G2期細(xì)胞比例未發(fā)生明顯改變，雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞凋亡率無明顯改變。
　　 結(jié)論：脫氧土霉素生物可降解支架對成纖維細(xì)胞的形態(tài)、生長代謝和增

5、殖不構(gòu)成明顯損害，滿足體內(nèi)植入的要求，為進(jìn)一步的動物實(shí)驗(yàn)提供了理論依據(jù)。
　　 第三部分，脫氧土霉素生物可降解支架對豬結(jié)腸吻合口愈合的影響
　　 研究目的：觀察脫氧土霉素生物可降解支架對豬結(jié)腸吻合口愈合過程的影響，評價(jià)該支架應(yīng)用于結(jié)腸吻合的安全性和有效性。
　　 研究方法：48只巴馬小型豬隨機(jī)分為三組進(jìn)行結(jié)腸吻合：脫氧土霉素生物可降解支架組(DS組)、左旋聚乳酸支架組(PS)和手工縫合組(HS)。術(shù)后四個(gè)時(shí)間點(diǎn)(

6、3天、7天、14天、30天)隨機(jī)處死動物并取材，觀察吻合口愈合大體情況，測定吻合口爆破壓。吻合口組織行HE染色、Masson染色觀察組織病理學(xué)改變，進(jìn)行TGF-β1、bFGF、α-SMA、CD31免疫組化染色，并測定其羥脯氨酸含量。以HS組為對照，行熒光定量PCR檢測MMP-2與MMP-9mRNA相對表達(dá)倍數(shù)。
　　 研究結(jié)果：所有手術(shù)均順利完成，無術(shù)中死亡，HS組14D標(biāo)本中有1例死于腸瘺，DS組麻醉過量死亡1例；余無腹腔膿腫

7、、無腸瘺、無腸梗阻發(fā)生。術(shù)后3天、7天PS組和DS組爆破壓明顯高于HS組，但PS組和DS組之間比較無明顯差異。吻合術(shù)后14天、30天三組之間爆破壓無明顯差異。HE染色和Masson染色中三組愈合過程相似，DS組和PS組較HS組炎癥反應(yīng)輕，膠原沉積增多。術(shù)后30天創(chuàng)面完全愈合，未發(fā)現(xiàn)DS組對結(jié)腸粘膜的損傷。免疫組化染色結(jié)果三組差異不明顯，TGF-β1和bFGF呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，α-SMA和CD31呈先上升再下降趨勢。三組3天起羥脯氨酸含量