中藥復(fù)方有效組分對(duì)APP轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及其作用機(jī)理研究.pdf

1、老年性癡呆又稱阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD),是一種常見(jiàn)的以進(jìn)行性認(rèn)知功能減退為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病。隨著全球人口的老齡化,AD的發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì),但迄今為止,AD作為一個(gè)世界醫(yī)學(xué)難題,其發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚,理想的治療手段和藥物仍然缺乏。中醫(yī)根據(jù)辨證論治,尤其是充分發(fā)揮中藥復(fù)方多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)、多向調(diào)節(jié)的作用特點(diǎn),在防治AD方面具有優(yōu)勢(shì)和前景。還腦益聰方是基于中醫(yī)AD“虛-瘀-濁-毒”病機(jī)

2、的中藥復(fù)方,經(jīng)前期臨床和實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)對(duì)AD有較好的防治作用,現(xiàn)應(yīng)用現(xiàn)代工藝技術(shù)提取其有效組分,進(jìn)一步研究本方對(duì)AD動(dòng)物模型的作用機(jī)理和效應(yīng)途徑,為臨床治療AD提供依據(jù)。
　　 目的:
　　 基于AD發(fā)病機(jī)理中的“AB級(jí)聯(lián)學(xué)說(shuō)”,研究中藥復(fù)方還腦益聰方有效組分對(duì)AD動(dòng)物模型腦組織Aβ生成途徑及炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的影響,探討還腦益聰方治療AD的作用機(jī)理。
　　 方法:
　　 選用3月齡APP695V7

3、17I轉(zhuǎn)基因小鼠AD模型,隨機(jī)分為模型組、鹽酸多奈哌齊組、還腦益聰方有效組分大劑量組和小劑量組,并設(shè)立正常對(duì)照組(C57BL/6J小鼠),連續(xù)灌胃6個(gè)月后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)共分為三個(gè)部分。第一部分,采用Morris水迷宮觀測(cè)APP轉(zhuǎn)基因小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力,采用跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)觀測(cè)小鼠一次性被動(dòng)回避反應(yīng)記憶功能,研究還腦益聰方對(duì)APP轉(zhuǎn)基因小鼠行為學(xué)的影響。第二部分,采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織APP、BACE和Aβ等蛋白

4、表達(dá)水平,采用剛果紅染色觀察小鼠腦組織淀粉樣沉積的變化,研究還腦益聰方對(duì)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織Aβ生成途徑的影響。第三部分,采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織AD免疫炎癥相關(guān)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、PPARγ的表達(dá)水平,采用放射免疫法檢測(cè)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織皮層和海馬的炎癥因子IL-6、hs-CRP的含量；采用雙縮脲法測(cè)定APP轉(zhuǎn)基因小鼠皮層、海馬的總蛋白含量；采用比色法檢測(cè)APP轉(zhuǎn)基因小鼠血清SOD活性,采用硫代巴比妥酸法測(cè)

5、定小鼠血清MDA含量,研究還腦益聰方對(duì)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)炎癥因子和氧化應(yīng)激的影響。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分,還腦益聰方對(duì)APP轉(zhuǎn)基因小鼠行為學(xué)的影響。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,還腦益聰方組和鹽酸多奈哌齊組小鼠在Morris水迷宮中穿越原平臺(tái)位置次數(shù)均較模型組顯著增多(P<0.05),在原平臺(tái)所在第四象限游泳時(shí)間和游泳路程亦均較模型組顯著延長(zhǎng)(P<0.05或P<0.01)。各給藥組小鼠在跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)中的錯(cuò)誤次數(shù)與模型組比較無(wú)顯著

6、性差異(P>0.05),還腦益聰方大劑量組和鹽酸多奈哌齊組小鼠潛伏期較模型組顯著延長(zhǎng)(P<0.01或P<0.05),還腦益聰方小劑量組小鼠潛伏期亦有延長(zhǎng)趨勢(shì),但較模型組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 第二部分,還腦益聰方對(duì)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織Aβ生成途徑的影響。還腦益聰方組和鹽酸多奈哌齊組小鼠海馬CA1區(qū)APP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目和面積比例較模型組均顯著減少(P<0.01)；還腦益聰方組小鼠海馬CA1區(qū)BACE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較模型

7、組顯著減少(P<0.01),鹽酸多奈哌齊組較模型組亦有所減少,但無(wú)顯著性差異(P>0.05)；各給藥組小鼠海馬CA1區(qū)Aβ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目和面積比例較模型組均顯著減少(P<0.05或P<0.01)。剛果紅染色發(fā)現(xiàn),模型組小鼠在皮層及海馬均出現(xiàn)散在分布的橘紅色沉積物,大小不一、染色不均,其中海馬體部分布較為密集；與模型組比較,還腦益聰方組和鹽酸多奈哌齊組小鼠腦組織橘紅色染色比較局限,染色較淺,數(shù)目明顯減少。
　　 第三部分,還腦益聰方

8、對(duì)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織炎癥因子和氧化應(yīng)激的影響。還腦益聰方組和鹽酸多奈哌齊組小鼠治療后,海馬CA1區(qū)NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較模型組顯著減少(P<0.05或P<0.01),PPARγ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較模型組顯著增多(P<0.05)；腦組織IL-6的含量比較,還腦益聰方組小鼠皮層IL-6的含量較模型組顯著減少(P<0.05或P<0.01),鹽酸多奈哌齊組小鼠皮層IL-6的含量較模型組亦有所減少,但無(wú)顯著性差異(P>0.05),還腦益聰方小劑量

9、組和鹽酸多奈哌齊組小鼠海馬IL-6的含量較模型組顯著減少(P<0.05),還腦益聰方大劑量組小鼠海馬IL-6的含量較模型組亦有所減少,但無(wú)顯著性差異(P>0.05)；腦組織hs-CRP的含量比較,各給藥組小鼠海馬和皮層的hs-CRP含量較模型組均呈減少趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異(P>0.05)。還腦益聰方組小鼠血清SOD活性較模型組顯著升高(P<0.05或P<0.01),鹽酸多奈哌齊組小鼠血清SOD活性與模型組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)

10、；各給藥組小鼠血清MDA含量與模型組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 還腦益聰方有效組分可以明顯改善APP轉(zhuǎn)基因小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力和一次性被動(dòng)回避反應(yīng)記憶功能；還腦益聰方有效組分可以通過(guò)下調(diào)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織APP及其β分泌酶的表達(dá),減少Aβ的生成和聚集,減少腦內(nèi)淀粉樣沉積的形成；還腦益聰方有效組分可以上調(diào)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織炎癥相關(guān)核轉(zhuǎn)錄因子PPARγ的表達(dá),抑制NF-κB的表達(dá),降低腦組