雄激素、雄激素受體及其相關miR-let-7a乳腺癌增殖關系的研究.pdf

1、第一部分：
　　 目的:
　　 研究雄激素受體(androgen receptor, AR)表達在不同雌激素受體(estrogenreceptor, ER)狀態(tài)乳腺癌中與各臨床病理特征間的關系及預后，探討雄激素受體在乳腺癌內(nèi)分泌治療中的指導作用。
　　 方法：
　　 從ER和PR陽性的乳腺浸潤性導管癌(invasive ductal carcinoma, IDC)病例中隨機選取111例為ER+組，從ER和

2、PR陰性病例中隨機選取113例為ER-組，共224例。采用免疫組化方法檢測AR、HER2、Ki67、p53中的表達，依據(jù)AR結果將ER+組再分為ER+AR+和ER+AR-兩個亞組，將ER-組再分為ER-AR+和ER-AR-兩個亞組，結合臨床病理資料進行組間比較分析和預后分析。
　　 結果：
　　 1.AR在浸潤性導管癌中的陽性表達率為67.9％，在ER+組和ER-組分別為80.2％、55.8％，兩組差異有顯著性(P=0.

3、002); AR與ER蛋白表達(P＜0.001)差異有統(tǒng)計學意義。AR陽性者體積小(P=0.007)，組織學分級低(P=0.001)，病理分期低(P=0.004)，AR狀態(tài)與Ki67、患者年齡、淋巴結轉(zhuǎn)移無相關性（P＞0.05）。雖然AR的表達與絕經(jīng)狀態(tài)差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但是在絕經(jīng)后乳腺癌病例中，AR的表達率(73.3％)高于絕經(jīng)前病例(62.0％)。
　　 2.在ER+組，AR陽性表達與腫瘤大小(P=0.01

4、5)，組織學分級(P=0.033)，分期(P=0.002)，淋巴結轉(zhuǎn)移(P=0.001)，接受內(nèi)分泌治療情況(P=0.007)相關，與其它臨床病理特征差異無顯著性(P＞0.05）。
　　 3.在ER-組，AR陽性表達者組織學分級低(P=0.039)，其中組織學Ⅱ級者所占的百分比較高;AR表達與HER-2過表達(P=0.039)和絕經(jīng)狀態(tài)(P=0.016)相關;AR表達與Ki67無相關性(P=0.157)，但在Ki67高表達者中A

5、R的陽性表達率有降低趨勢。
　　 4.Kaplan-Meier生存分析顯示AR表達與無瘤生存有明顯相關性(P＜0.001)，在ER+組和ER-組，AR陽性者均具有較好的預后(P＜0.001，P=0.046)。對224例患者和ER+組患者分別進行COX多因素分析，結果顯示AR狀態(tài)是影響無瘤生存的獨立因素的獨立因素(95％置信區(qū)間，040-0.054，P=0.003;95％置信區(qū)間，0.03-0.512，P=0.004)。
　

6、　 結論：
　　 在不同激素狀態(tài)乳腺癌中檢測AR表達可作為有意義的指標來估測預后、為選擇性指導臨床內(nèi)分泌治療和個體化治療提供理論依據(jù)。除了ER、PR、HER2在乳腺癌中表達，AR蛋白也應成為乳腺癌常規(guī)檢測項目之一，在ER陰性乳腺癌發(fā)病機理和個體化激素治療的研究中具有較為重要的價值。AR可以作為指導臨床內(nèi)分泌治療新的靶標，為不同ER狀態(tài)乳腺癌激素治療提供依據(jù)。
　　 第二部分：
　　 目的：
　　 研究雄

7、激素受體(androgen receptor, AR)與microRNA-let7a(miR-let-7a)之間的相互作用，AR活化后miR-let-7a及其下游靶基因?qū)R+AR+的乳腺癌MCF7細胞系增殖的影響。
　　 方法：
　　 本研究選擇雌激素受體(estrogen receptor, ER)陽性乳腺癌細胞系，體外培養(yǎng)，用實時定量PCR(real timePCR，RT-PCR)驗證miR-let-7a在雄激素二

8、氫睪酮(5alpha-dihydrotestosterone，DHT)組表達明顯上調(diào)。通過向MCF7細胞系中轉(zhuǎn)染miR-let-7a高表達或低表達載體，應用MTT檢測miR-let-7a對乳腺癌MCF7細胞生長增殖的影響;并應用流式細胞術檢測轉(zhuǎn)染miR-let-7a前后乳腺癌細胞周期的變化。應用Western blot的方法驗證轉(zhuǎn)染miR-let-7a前后，其下游靶蛋白ER-α、c-Myc、k-ras表達的變化。本研究初步探討AR和le

9、t-7之間的相互作用以及AR/miR-let-7a下游靶基因的表達對抑制ER+AR+乳腺癌MCF7細胞生增殖的影響。
　　 結果：
　　 1.實時定量PCR顯示10-8mol/L雄激素刺激后，miR-let-7a mRNA水平表達是明顯上調(diào)的。提示AR活化信號可調(diào)節(jié)miR-let-7a的表達。
　　 2.MTT顯示miR-let-7a對MCF7細胞的生長具有明顯的抑制作用，抑制率呈時間相關性，即隨著時間的延長細胞

10、生長抑制率呈逐漸增高趨勢，miR-let-7a對MCF7細胞的抑制作用高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，P＜0.01)。與對照組相比，miR-let-7a轉(zhuǎn)染組MCF7細胞中G1期細胞比例增高(73.59％)，S期細胞比例明顯降低(18.58％);對照組G1期65.98％，S期27.65％。miR-let-7aantisense oligonucleotides(ASOs)轉(zhuǎn)染組MCF7細胞中G1期細胞比例降低64.87％，S

11、期細胞比例明顯增高28.37％，對照組G1期72.42％，S期20.55％。提示miR-let-7a可能將MCF7細胞阻滯于G1期，miR-let-7a可能抑制細胞自G1期向S期轉(zhuǎn)化。
　　 3.未轉(zhuǎn)染miR let-7a的乳腺癌MCF-7細胞中Western blot分析結果顯示DHT處理組ER、c-Myc、k-ras蛋白表達減少，而DHT處理前后內(nèi)參GAPDH的條帶亮度幾乎無差異。miR let-7a過表達時，ER-α、c-

12、Myc、k-ras各蛋白的表達與對照組相比明顯降低，AR蛋白表達沒有明顯變化;相反，轉(zhuǎn)染miR let-7a抑制劑的MCF7細胞系中，ER-α、c-Myc、k-ras蛋白表達則增高，AR表達也有所增加。
　　 結論：
　　 1.雄激素是通過與其相應的AR受體結合來發(fā)揮其生物學效應的，研究顯示AR活化信號可以明顯上調(diào)miR-let-7a的表達。miR-let-7a可以抑制乳腺癌MCF7細胞系的增殖，并使細胞周期阻滯于G1/