A-B同型雄激素受體與前列腺癌關系的研究.pdf

1、前列腺癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。根據2009年的數據，前列腺癌已經成為歐洲和美國男性最大的殺手。前列腺是男性獨有的性腺器官，也是一種雄激素依賴的器官，而雄激素是通過其受體發(fā)揮作用的，雄激素受體(AR)則是雄激素代謝和發(fā)揮作用過程中的中心環(huán)節(jié)之一。因此，雄激素受體在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中占有重要地位。
　　 受孕激素受體(PR)亞型和雌激素受體(ER)亞型的啟發(fā)，1993年Carol在人的生殖器皮膚成纖維細胞中首次證實雄激素受

2、體A、B兩種同型受體的存在，分別是AR-B和AR-A。其中AR-B是完整、全長的雄激素受體，分子量為110 kDa，它是正常成人大多數組織中最常見雄激素受體亞型，所占比例高達80％～95％。而AR-A缺乏完整氨基端結構，比AR-B少N端起始部位的188個氨基酸，它但其DNA結合區(qū)和激素結合區(qū)結構完整，分子量為87 kDa，在正常成人大多數組織中表達水平較低，所占比例低于20％。目前尚無克隆AR-A mRNA的報道。雄激素存在A、B兩種同

3、型受體這種情況與孕激素受體(PR)極為相似：二者同為單一基因，轉錄一條mRNA，同樣存在完全轉錄和部分轉錄的A、B兩種同型受體。研究表明：子宮內膜癌和乳腺癌的發(fā)病與孕激素A、B兩種同型受體存在著密切相關性，孕激素A、B受體的分布、表達和丟失與乳腺癌、卵巢腫瘤的內分泌療效亦存在密切相關。也有研究表明，孕激素A、B兩種同型受體的生物學功能不同。
　　 與孕激素同型受體的研究相比，有關雄激素A、B同型受體的研究目前還只是方興未艾。Ca

4、talano在對結腸癌中AR的研究發(fā)現，在正常結腸粘膜中AR-A和AR-B均有表達，但在結腸癌組織中AR-B表達缺失，提示兩者在腫瘤的形成發(fā)展過程中可能發(fā)揮不同的作用。Liegibel等研究發(fā)現AR-A和AR-B兩者的功能不同。
　　 目的:
　　 研究A/B同型雄激素受體在不同前列腺組織中的表達，明確前列腺癌組織中A/B同型雄激素受體表達的變化，并研究探討A/B同型雄激素受體在前列腺癌中的功能，明確A/B同型雄激素受體

5、表達變化及功能差異在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　 方法：
　　 本研究旨在通過應用Western blot、免疫熒光技術，研究分析50例前列腺癌、15例前列腺增生和15例正常前列腺組織中A/B同型雄激素受體蛋白的表達情況，從蛋白表達水平研究原發(fā)性前列腺癌組織中A/B同型雄激素受體蛋白表達水平的改變。同時應用realtime-PCR技術研究不同前列腺組織中雄激素受體mRNA表達的變化。通過質粒制作、質粒轉染等技術初步

6、研究前列腺癌細胞中A/B同型雄激素受體蛋白的功能差異，觀察二者對前列腺癌PC3細胞增殖能力、侵襲能力、遷移能力的影響。
　　 結果:
　　 Western Blot結果顯示：各個前列腺癌、前列腺增生以及正常前列腺組織均表達AR-A與AR-B兩種同型雄激素受體。其中全長的AR-B雄激素受體是優(yōu)勢表達受體，占總數的95～80％，AR-A型雄激素受體表達量較低，占總數的5～20％，與文獻報道相符。正常前列腺組織和前列腺增生組織

7、中AR-A(P=0.703)和AR-B(P=0.505)表達量及AR-A/AR-B比值(P=0.871)差異無統(tǒng)計學意義。前列腺癌組織中AR-A、AR-B雄激素受體表達量及AR-A/AR-B比值較正常前列腺中表達量本別增高2.8倍、1.47倍和1.92倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。較前列腺增生組織組織中AR-A、AR-B及AR-A/AR-B比值較正常前列腺中表達量本別增高2.38倍、1.37倍和1.75倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜

8、0.01)。AR-A和AR-B的表達與前列腺癌患者的年齡無關(p＞0.05)，但與前列腺癌Gleason評分有關。Gleason評分＞7的前列腺癌患者組織中AR-A的表達量較Gleason評分≤7的前列腺癌患者組織中增高1.25倍，同時AR-B增高1.15倍。差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。而Gleason評分＜7的前列腺癌組織中，AR-A和AR-B的表達量及二者比例較正常前列腺組織和前列腺增生組織增高(P＜0.05)。臨床分期＞T2

9、期的前列腺癌患者組織中，AR-A和AR-B的表達量及二者比例較臨床分期≤T2期的前列腺癌患者組織高，但差異無統(tǒng)計學意義，可能與臨床分期＞T2期的前列腺癌患者數量較少有關。為在組織中進一步確證A/B同型雄激素受體蛋白的表達，我們使用雙重免疫熒光組織化學結果顯示：前列腺癌組織中AR-B和AR-A+B雄激素受體表達量較正常前列腺2.53倍和2.10倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。前列腺癌組織中AR-B和AR-A+B雄激素受體表達量較前列

10、腺增生組織中表達量增高2.31倍和1.93倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Gleason評分＞7的前列腺癌患者組織中AR-B的表達量較Gleason評分≤7的前列腺癌患者組織中增高1.25倍，同時AR-A+B增高1.15倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。A/B同型雄激素受體蛋白的表達臨床分期無關，可能與臨床分期＞T2期的前列腺癌患者數量較少有關。此結果與Western Blot結果相符。我們使用Realtime-PCR技術檢測

11、了前列腺癌，前列腺增生和正常前列腺標本中AR mRNA的表達水平，結果顯示正常前列腺組織和前列腺增生組織中AR mRNA表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。前列腺癌組織中AR mRNA表達增高10.65倍(P=0.019)和11.93倍(P=0.019)。前列腺癌組織中，Gleason評分＞7的前列腺癌患者組織中AR mRNA的相對表達量增高，較Gleason評分≤7的前列腺癌患者組織中AR mRNA的表達量增高5.02倍。差異有統(tǒng)計

12、學意義(P＜0.05)。分期＞T2的前列腺癌患者組織中AR mRNA的相對表達量增高，較分期≤T2的前列腺癌患者組織中AR mRNA的表達量增高1.45倍，差異無統(tǒng)計學意義，考慮與分期＞T2的前列腺癌組織僅僅4例，數量較少有關。
　　 在胞漿蛋白與胞核蛋白分別電泳的結果中，我們發(fā)現AR-A雄激素受體蛋白僅在胞漿蛋白中表達，胞核蛋白中不表達AR-A雄激素受體蛋白，而AR-B雄激素受體蛋白在胞漿蛋白和胞核蛋白中都有表達。進一步研究結

13、果顯示：LNCaP細胞雄激素饑餓培養(yǎng)5天后，加入睪酮刺激2小時，AR-A雄激素受體蛋白可以在睪酮刺激下由細胞漿轉運進入LNCaP細胞核內。在進行免疫共沉淀后行Western Blot檢測的結果顯示：A/B同型雄激素受體二者不可形成異二聚體。此結果與AR-A/B在亞細胞結構分布不同相印證：如果AR-A與AR-B能形成異二聚體，則二者不可能在亞細胞結構分布上如此不同。
　　 為進一步研究AR-A在前列腺癌細胞中的生物學活性，我們使用

14、pEGFP-AR質粒通過突變后，制作出僅表達AR-A的新質粒pEGFP-AR-A。通過質粒轉染技術將AR-A轉染進入不表達雄激素受體的前列腺癌細胞系PC3細胞，獲得僅僅表達AR-A的前列腺癌細胞PC3-AR-A。通過增殖實驗我們發(fā)現，AR-A可以抑制前列腺癌細胞PC3細胞的增殖，抑制率在第3天以后維持在61％左右，而AR-B的抑制率僅維持在10％-20％。侵襲實驗和增殖實驗結果顯示，AR-A和AR-B都可以抑制前列腺癌細胞的侵襲能力和增

15、殖能力，AR-A轉染的PC3細胞的遷移、侵襲能力較PC3組降低20.6％和29.3％。AR轉染的PC3細胞侵襲、遷移能力最低，較PC3組降低39.4％和44.4％。
　　 結論:
　　 A/B同型雄激素受體在原發(fā)性前列腺癌的組織中表達量增高，且A/B二者比例增高。A/B同型雄激素受體蛋白的表達量和表達比例與病理分級及臨床分期有關。侵襲實驗結果顯示，AR-A可以降低前列腺癌細胞的侵襲能力和增殖能力。前列腺癌組織中的A/B同