miRNA-200b及其靶基因IGF-2R在卵巢漿液性腫瘤中的表達研究.pdf

1、卵巢漿液性腫瘤(ovarian serous tumors)是最常見的婦科腫瘤之一，占卵巢上皮-間質(zhì)腫瘤的46％，其良性腫瘤，交界性腫瘤及惡性腫瘤的比例大約為60％，10％和30％。近年來，盡管臨床上惡性漿液性卵巢癌的綜合治療已經(jīng)很普遍，但以手術(shù)為主，化療為輔的綜合治療對卵巢癌的生存率并沒有顯著提高。miRNA表達研究過程中，基因芯片技術(shù)可以有效快捷地比較大量miRNAs表達變化情況。在芯片檢測結(jié)果后，利用實時熒光定量PCR方法是驗證m

2、iRNA芯片數(shù)據(jù)或檢測單個miRNA表達的高靈敏度的方法。胰島素樣生長因子受體IGF-2R是miRNA-200家族Target Scan軟件預(yù)測的常見靶基因，IGF-2R信號通路參與調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，目前尚未有研究證實IGF-2R是miRNA-200家族的靶基因，IGF-2R與miRNA-200家族在卵巢漿液性腺癌中發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)分子機制仍然需要深入研究。
　　目的:用小RNA高通量測序技術(shù)篩選卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌組

3、織中差異表達的microRNAs，實時熒光定量PCR驗證其表達量，探討差異表達microRNAs在漿液性乳頭狀囊腺癌中的作用機制;在蛋白水平檢測miRNA-200家族中的miRNA-200b預(yù)測靶基因IGF-2R在卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌，交界型漿液性囊腺瘤、漿液性囊腺瘤及正常卵巢的表達，探討它們的相關(guān)性及與臨床病理特征間的關(guān)系，為發(fā)掘miRNA-200家族作為新一代的惡性漿液性卵巢癌早期診斷的腫瘤分子標志物的可行性提供理論基礎(chǔ)。

4、　　方法:(1)取3例惡性卵巢腫瘤（術(shù)中快速及術(shù)后病理檢測結(jié)果均證實為卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌）做為腫瘤組，手術(shù)切除3例正常卵巢組織（來源于子宮肌瘤子宮+雙附件切除標本）做為對照組，采用小RNA高通量測序平臺及相關(guān)軟件獲取掃描圖像和對原始數(shù)據(jù)進行分析運算，選取在惡性漿液性卵巢腫瘤中表達較其它miRNA高的miRNA200家族，且與正常卵巢組織中的表達相比在漿液性卵巢腺癌中明顯過度表達的has-miR-200b-3p為進一步研究對象;(2)

5、通過實時熒光定量PCR技術(shù)驗證芯片結(jié)果;(3)采用免疫組織化學(xué)方法檢測has-miR-200b-3p靶蛋白胰島素生長因子2受體(IGF-2R)在86例卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌，卵巢交界型漿液性囊腺瘤、卵巢漿液性囊腺瘤及正常卵巢的表達，結(jié)合患者的臨床資料統(tǒng)計分析相關(guān)指標之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:(1)所提取的RNA經(jīng)過質(zhì)量檢測符合芯片實驗需求;(2)惡性漿液性卵巢腫瘤組和對照組芯片研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)107個miRNA差異表達（其中84個表達顯

6、著上調(diào)，23個表達顯著下調(diào)）;(3)選取漿液性卵巢癌標本中表達顯著上調(diào)的has-miR-200b-3p進行定量研究，其結(jié)果符合芯片分析結(jié)果;(4)免疫組化SP法檢測IGF-2R蛋白在正常卵巢組織、漿液性囊腺瘤、交界型漿液性囊腺瘤、漿液性乳頭狀囊腺癌中陽性表達率依次減弱，分別為100％、93.3％、86.7％和47.8％。卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌組織與卵巢交界型漿液性囊腺瘤，卵巢漿液性囊腺瘤及正常卵巢組織IGF-2R蛋白陽性表達率比較，均存

7、在顯著統(tǒng)計學(xué)差異(雙側(cè)P=0.008;P=0.002，P=0.003)，正常卵巢組織和卵巢漿液性囊腺瘤比較沒有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（雙側(cè)P=0.405，P＞0.05）;IGF2R表達的陽性表達程度與患者的年齡、病理學(xué)分級無顯著差異(P＞0.05)，與不同的臨床分期、腹腔有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和生存狀態(tài)有顯著差異(P均＜0.05）。
　　結(jié)論:卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌中存在差異表達的miRNA，這些差異表達的miRNA有可能作為上皮性卵巢癌新的診斷