青藤堿對(duì)大鼠RA模型Th17及DC細(xì)胞MAPK信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白磷酸化的影響研究.pdf

1、目的：
　　探討青藤堿對(duì)RA大鼠模型外周血及關(guān)節(jié)滑膜Th17相關(guān)細(xì)胞因子的影響，明確青藤堿對(duì)Th17細(xì)胞的作用；探討青藤堿對(duì)DC細(xì)胞MAPK信號(hào)通路蛋白磷酸化的影響，明確青藤堿治療RA的作用途徑，進(jìn)而探討青藤堿通過(guò)MAPK信號(hào)通路蛋白磷酸化而對(duì)Th17致炎過(guò)程的影響，由此揭示青藤堿對(duì)RA大鼠模型的作用靶點(diǎn)及機(jī)制。
　　方法：
　　1、利用液相芯片技術(shù)檢測(cè)血清中IL-1β、IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β等含

2、量，分析青藤堿對(duì)外周血中Th17相關(guān)因子的影響。
　　2、采用ELISA法和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)IL-10、MCP-1和關(guān)節(jié)滑膜部位IL-17的表達(dá)，觀察并分析外周血與關(guān)節(jié)滑膜部位細(xì)胞因子的表達(dá)特征及青藤堿對(duì)該因子的影響。
　　3、利用液相蛋白芯片技術(shù)檢測(cè) DC2.4細(xì)胞內(nèi) MAPK信號(hào)通路磷酸化蛋白p38MAPK、JNK/c-jun、ERK、MEK1，分析青藤堿對(duì)MAPK信號(hào)通路上關(guān)鍵蛋白質(zhì)磷酸化的影響。
　　結(jié)果：<

3、br>　　1、通過(guò)分析比較，與模型組相比，青藤堿中、低劑量組RA大鼠模型外周血中IL-1β、IL-6、IL-17、IFN-γ的表達(dá)量明顯降低，同時(shí)IL-10、TGF-β表達(dá)量明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2、青藤堿作用于 DC2.4細(xì)胞后，蛋白質(zhì)在不同時(shí)間點(diǎn)發(fā)生磷酸化的情況不同，P38MAPK在用藥72h，青藤堿中、高劑量組磷酸化p38MAPK的量明顯低于模型組；JNK在用藥72h磷酸化JNK蛋白的量最少，青

4、藤堿中、高劑量組活性JNK的量明顯低于模型組；c-jun在用藥72h磷酸化c-jun蛋白的量最少，青藤堿中、高劑量組活性c-jun蛋白的量最少，明顯低于模型組，且JNK與c-jun磷酸化趨勢(shì)一致；ERK在用藥24h發(fā)生磷酸化的量最少，青藤堿中、高劑量組活性 ERK的量明顯低于模型組； MEK1在用藥72h，發(fā)生磷酸化的量最多，青藤堿各劑量組活性MEK1的量均明顯高于模型組。
　　結(jié)論：
　　1、中、低劑量青藤堿可明顯降低外周

5、血中IL-1β、IL-6、IL-17、IFN-γ、MCP-1的含量，升高IL-10、TGF-β的含量，從而達(dá)到調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞活性，治療RA的目的。
　　2、青藤堿可在作用一定時(shí)間內(nèi)降低p38MAPK、JNK、c-jun、和ERK蛋白磷酸化程度，升高 MEK1的磷酸化程度，表明其可能通過(guò)影響 DC2.4細(xì)胞內(nèi)p38MAPK、JNK、c-jun、和ERK蛋白磷酸化程度來(lái)調(diào)控其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，影響細(xì)胞因子的分泌，調(diào)控T細(xì)胞的分化和活化，