Hep G2、Bel-7402細(xì)胞裸鼠皮下移植性肝癌模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，其中肝細(xì)胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是肝癌中最常見的類型，占到病例總數(shù)的70％~80%。為了深入研究肝癌的發(fā)病機(jī)理，探索新的治療方法，建立科學(xué)的肝癌動(dòng)物模型是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。
　　本課題擬通過比較HepG2、Bel-7402兩種人肝癌細(xì)胞在不同條件下行裸鼠皮下移植時(shí)成瘤率的不同，以及兩種細(xì)胞成瘤后腫瘤形態(tài)、腫瘤體積變化規(guī)律及AFP表達(dá)方面的差異，從中選擇一種合適的腫瘤

2、細(xì)胞，并探索其最佳的成瘤條件，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)提供數(shù)據(jù)。
　　目的：
　　1．比較HepG2、Bel-7402兩種人肝癌細(xì)胞在不同條件下行裸鼠皮下移植時(shí)成瘤率與成瘤潛伏期的差別。
　　2．比較HepG2、Bel-7402兩種細(xì)胞荷瘤鼠皮下腫瘤生長速度的差別，并歸納其腫瘤增長規(guī)律。
　　3.比較HepG2、Bel-7402兩種細(xì)胞荷瘤鼠腫瘤大體形態(tài)學(xué)差異，檢測血清AFP濃度并做腫瘤組織的病理、免疫組化分析。
　　

3、方法：
　　1．將90只BALB/c裸鼠按照腫瘤細(xì)胞懸液的濃度及鼠齡隨機(jī)平均分成9組，其中8組分別皮下注射HepG2細(xì)胞和Bel-7402細(xì)胞，第9組為對(duì)照組。比較HepG2、Bel-7402這兩種人肝癌細(xì)胞在不同條件下成瘤率與成瘤潛伏期的差別。
　　2．HepG2、Bel-7402兩種細(xì)胞裸鼠皮下成瘤后每周用游標(biāo)卡尺測量瘤體大小。腫瘤體積的計(jì)算公式V=πab2/6（V：體積，a：腫瘤長徑，b：腫瘤短徑）。
　　3．裸

4、鼠成瘤后，利用化學(xué)發(fā)光法檢測裸鼠血清AFP濃度，觀察HepG2、Bel-7402兩種細(xì)胞形成的裸鼠皮下腫瘤大體形態(tài)的差異，將切下的腫瘤組織行免疫組化法檢測AFP及HepPar1表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.當(dāng)HepG2細(xì)胞懸液濃度達(dá)到5.0×107/ml，4~8周齡和8~12周齡的裸鼠均能得到很高的成瘤率（均為100%）。而對(duì)于Bel-7402細(xì)胞，細(xì)胞懸液濃度必須達(dá)到5.0×107/ml，且僅在4~8周齡的裸鼠皮下注射才能得

5、到較高的成瘤率（80%）。
　　2.HepG2、Bel-7402兩種細(xì)胞在同等條件下裸鼠個(gè)體間的出瘤時(shí)間并不恒定，HepG2細(xì)胞平均成瘤時(shí)間為19.4±5.2天；而Bel-7402細(xì)胞平均成瘤時(shí)間為34.3±15.7天。
　　3.HepG2細(xì)胞裸鼠皮下腫瘤的典型表現(xiàn)為多發(fā)的節(jié)結(jié)樣突起，腫瘤組織內(nèi)部由多個(gè)白色的節(jié)結(jié)樣團(tuán)塊組成。Bel-7402細(xì)胞皮下腫瘤的表面則為較平滑，腫瘤組織內(nèi)部周邊較韌，瘤體中心則主要是豆腐渣樣壞死組織。

6、
　　4.兩種細(xì)胞荷瘤鼠成瘤后第4周查血清AFP均陰性。免疫組化檢測HepG2細(xì)胞腫瘤HepPar1表達(dá)呈陽性、Bel-7402細(xì)胞腫瘤HepPar1表達(dá)呈陰性；而兩種細(xì)胞AFP表達(dá)均為陰性。
　　結(jié)論：
　　1．建立裸鼠肝癌動(dòng)物模型時(shí)，HepG2細(xì)胞較Bel-7402細(xì)胞更易裸鼠皮下成瘤。
　　2．HepG2細(xì)胞較Bel-7402細(xì)胞成瘤潛伏期更短，并且成瘤后腫瘤增長速度更快。
　　3．HepG2細(xì)胞、B