AG490聯(lián)合VEGF對(duì)肝大部分切除術(shù)后肝再生的作用.pdf

1、目的:
　　獲取阻斷JAK-STAT通路改造炎癥微環(huán)境的可靠證據(jù)，闡明對(duì)抗過度炎癥反應(yīng)保護(hù)功能性殘肝細(xì)胞的作用機(jī)制。在此基礎(chǔ)之上，探討聯(lián)合VEGF誘導(dǎo)肝細(xì)胞再生的協(xié)同效應(yīng)，為臨床防治擴(kuò)大性肝切除術(shù)后肝損傷、肝衰竭提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　擴(kuò)大性肝切除術(shù)后急性肝衰模型建立后，隨機(jī)分為A、B、C、D四組(NA=15只，NB=35只，NC=25只，ND=45)。模型建立后，術(shù)后即時(shí)及術(shù)后12、24、36h分別施藥。A組

2、:AG490+VEGF;B組:VEGF;C組:AG490;D組:對(duì)照組;觀察對(duì)比術(shù)后體重變化，精神狀態(tài)，活動(dòng)度，進(jìn)食及術(shù)后生存時(shí)間，生存率等;通過免疫組化、RT-PCR、Western blotting等檢測與分析功能性殘肝細(xì)胞功能，肝細(xì)胞的再生情況，白細(xì)胞介素6(IL-6)和白細(xì)胞介素10(IL-10)、磷酸化Jak2和Stat3蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　一、其中A組與B，C，D組相比，在術(shù)后蘇醒時(shí)間，精神狀態(tài)，進(jìn)

3、食，體重變化，生存時(shí)間等都其他組較好。術(shù)后24小時(shí)，各組大鼠開始出現(xiàn)死亡，在術(shù)后48-72小時(shí)達(dá)到死亡高峰期。在死亡的大鼠尸體解剖后，可見肝葉腫脹，腹腔有中等量腹水，腹脹等，均未發(fā)現(xiàn)有術(shù)后大出血或血管栓塞等情況，考慮死亡大鼠是由于肝臟的極度功能障礙引起。
　　二、A組術(shù)后平均生存時(shí)間為108.0±6.2h，而B，C，D組分別約為78.9±5.7h，89.2±7.0h，73.0±4.8h;通過統(tǒng)計(jì)，其中A組與B，C組相比，P值分別為

4、0.003，0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≤0.05）;而B，C組與D組相比，P值分別為0.486，0.046。術(shù)后大鼠12h之前，生存率都較高，幾乎達(dá)到了100％，未見死亡情況;各組生存率中，以A組最高，累積達(dá)到80％，B組為28.6％，C組為44％，D組為20％。A與B，A與C，B與D，C與D兩者相比，通過Log Rank(Mantel-Cox)檢驗(yàn)，其P值分別為:P=0.03，P=0.04 P=0.40，P=0.04，其中A與B，A

5、與C及C與D，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組與D組相比，雖然P＞0.05，但其生存率依然大于D組。
　　三、大鼠肝切除后病理示:肉眼下觀察剩余肝臟呈彌漫性變性，HE染色觀察肝臟微循環(huán)變化包括中央靜脈擴(kuò)張，肝竇擴(kuò)大，48h肝竇明顯擴(kuò)張。肝細(xì)胞的改變包括空泡變，細(xì)胞腫脹，變大，胞質(zhì)稀疏，炎細(xì)胞浸潤，點(diǎn)狀和片狀壞死。在同一時(shí)間段，病理性反應(yīng)A組較B，C組更輕。
　　四、肝再生:術(shù)后24h，48h，72h，120h，肝再生率A組與

6、其他三組相比，P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尤以72h明顯。肝再生率的變化從術(shù)后24h開始增加，在72h基本上達(dá)到高峰，之后再生緩慢，且肝再生基本上與PCNA的增長一致;術(shù)后48小時(shí)，PCNA染色可見肝細(xì)胞已有明顯增生，術(shù)后A組與其他三組相比，P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　五、肝功能指標(biāo)。ALT、AST、TBIL從術(shù)后開始便增高，在24h時(shí)達(dá)到高峰，然后便慢慢開始降低。從曲線上看，D組較其他組急升降，其他三組變化較平穩(wěn)，AL

7、T、AST、Tbil變化大致一致，在術(shù)后8h-120h之間，A組與B，C，D相比，P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尤其在24h時(shí)明顯。同時(shí)B，C組與D組相比，ALT、AST、Tbil明顯改善，P＜0.05，說明AG490和VEGF均具有促進(jìn)術(shù)后肝功能恢復(fù)，保護(hù)剩余肝細(xì)胞。
　　六、從IL-6，IL-10與內(nèi)參的相對(duì)比值表現(xiàn)上看，IL-6，IL-10均呈單峰變化，A，C和B，D組分別在24h，48h達(dá)到最大值，B，D組變化較明顯。A組

8、與其他三組相比，具有明顯差別，A組炎癥反應(yīng)較D組小，同時(shí)較C組強(qiáng)，說明了AG490的抑制炎癥反應(yīng)作用，同時(shí)在各時(shí)間點(diǎn)，IL-10則表現(xiàn)出相對(duì)應(yīng)的變化趨勢(shì)。
　　七、本實(shí)驗(yàn)分別選取了大鼠術(shù)后12h，24h，72h，120h肝臟組織做蛋白檢查。磷酸化Jak2-Stat3變化基本一致，各組蛋白在術(shù)后24h達(dá)到峰值，之后便開始下降，A組與其他組相比，P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)取得的主要成果如下:

9、r>　　一、外源性VEGF能促進(jìn)術(shù)后肝細(xì)胞PCNA的表達(dá)，增強(qiáng)術(shù)后肝細(xì)胞DNA的合成和增值活性，從而促進(jìn)肝再生;明確了外源性VEGF能降低ALT, AST, TBIL等，改善術(shù)后肝功能，提高術(shù)后生存率。
　　二、明確了AG490的抑制炎癥作用，降低IL-6，磷酸化Jak2-Stat3的表達(dá)，保護(hù)剩余肝細(xì)胞的作用，提高了大部分肝切除術(shù)后生存率。
　　三、聯(lián)合AG490，VEGF，能更好地改善肝臟的微循環(huán)，促進(jìn)肝細(xì)胞的修復(fù)和再生