通平養(yǎng)心方對(duì)高糖誘導(dǎo)H9c2細(xì)胞損傷保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察通平養(yǎng)心方（TP）對(duì)高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞損傷的線(xiàn)粒體保護(hù)作用,并初步探討其作用機(jī)制，為治療糖尿病心肌病藥物研發(fā)和臨床推廣應(yīng)用提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：本研究用高糖建立大鼠胚胎心臟組織來(lái)源的H9c2細(xì)胞損傷模型。采用MTT法測(cè)定高糖對(duì)心肌細(xì)胞存活率的影響及通平養(yǎng)心方預(yù)處理的防護(hù)作用，并以JNK抑制劑預(yù)處理為陽(yáng)性對(duì)照；應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡成像法觀察通平養(yǎng)心方是否通過(guò)抑制線(xiàn)粒體通透性轉(zhuǎn)移孔（mitochondri

2、al permeability transition pore，mPTP）的開(kāi)放而發(fā)揮心肌線(xiàn)粒體的保護(hù)作用；同時(shí)用 Western-blot法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞磷酸化JNK，磷酸化GSK-3β蛋白表達(dá)，初步探討該方心肌保護(hù)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　結(jié)果：1、激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)結(jié)果顯示，應(yīng)用高濃度葡萄糖（33mmol/L）處理心肌 H9c2細(xì)胞20min之后，其 TMRE熒光強(qiáng)度明顯減弱（TMRE熒光強(qiáng)度降至45.1±2.8％，P<

3、0.05）。不同濃度的通平養(yǎng)心方（10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml）預(yù)處理組與高濃度葡萄糖對(duì)照組相比較，其熒光減弱程度有一定程度的減輕，而主要以0.1μg/ml濃度的通平養(yǎng)心方處理組這一作用最為顯著（TMRE熒光強(qiáng)度為90.1±3.7%，P<0.05），提示通平養(yǎng)心方可以通過(guò)防止 mPTP的開(kāi)放來(lái)對(duì)抗高糖誘導(dǎo)的心肌 H9c2細(xì)胞損傷。2、采用 MTT法檢測(cè)心肌細(xì)胞的增殖率，首先與低

4、糖對(duì)照組相比較，高濃度葡萄糖處理能使細(xì)胞生存率下降（細(xì)胞生存率降至73.0±2.0%，P<0.05），說(shuō)明高濃度葡萄糖能夠引起心肌細(xì)胞的損傷。而在給予通平養(yǎng)心方（0.1μg/ml）預(yù)處理之后再加入高濃度葡萄糖，能夠部分對(duì)抗高糖損傷引起的細(xì)胞生存率下降（89.3±3.5%，P<0.05），0.1μg/ml通平養(yǎng)心方處理組細(xì)胞生存率明顯增加（102.7±2.9%，P<0.05），也證實(shí)了通平養(yǎng)心方具有心肌細(xì)胞保護(hù)的作用。3激光共聚焦結(jié)果顯示

5、，與高糖對(duì)照組相比，JNK抑制劑 SP600125（10μM）能夠明顯抑制 mPTP的開(kāi)放（TMRE熒光強(qiáng)度為88.9±3.9%，P<0.05），而Western blot結(jié)果也證實(shí)TP能夠抑制高糖對(duì)心肌細(xì)胞磷酸化JNK表達(dá)的上調(diào)作用（110.3±6.6，P<0.05），增加磷酸化 GSK-3β水平（130.9±7.3%, P<0.05），提示 TP可能是通過(guò)抑制 JNK的活性阻止 mPTP開(kāi)放發(fā)揮心臟保護(hù)作用的。
　　結(jié)論：通平