Ucf-101對(duì)新生大鼠窒息后腎組織Omi-HtrA2的線粒體凋亡途徑的影響.pdf

1、目的：研究Ucf-101對(duì)新生大鼠窒息后腎組織Omi/HtrA2的線粒體凋亡途徑的影響
　　 方法：以7-10日齡Wistar新生大白鼠為研究對(duì)象，制成常壓窒息模型。實(shí)驗(yàn)將新生大鼠共分為三組：對(duì)照組（n=24）、窒息組（n=24）、Ucf-101組（n=24）。Ucf-101組在窒息前10min，按1.5μmol/kg腹腔注射Ucf-101，其余兩組在相同時(shí)點(diǎn)注射等量生理鹽水。在窒息30min復(fù)氧2、24、48h時(shí)切頸取左腎，制

2、作石蠟切片，采用免疫組化SP法檢測(cè)各組。腎組織中Omi/HtrA2的表達(dá)。采用原位細(xì)胞凋亡TUNEL法檢測(cè)腎凋亡細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量變化。采用冰凍切片間接免疫熒光雙染色法，在激光共聚焦顯微鏡下觀察Omi/HtrA2在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)位。RT-PCR檢測(cè)Omi/HtrA2 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。
　　 結(jié)果：（1）Omi/HtrA2主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)。在常氧下，Omi/HtrA2有少量表達(dá)（IOD值：2h1.60±0.21、24

3、h1.47±0.22、48h1.37±0.16）。缺氧/復(fù)氧后Omi/HtrA2的表達(dá)呈現(xiàn)時(shí)間依賴性，于24 h達(dá)最高峰，48h表達(dá)減少（IOD值：2h5.96±0.63、24h45.9±2.03、48h25.65±0.86）。Ucf-101組各時(shí)間點(diǎn)Omi/HtrA2的陽(yáng)性表達(dá)明顯減少（IOD值：2h3.5±0.22、24h19.26±0.52、48h12.62±0.53）；（2）窒息組復(fù)氧后2h出現(xiàn)腎小管上皮細(xì)胞凋亡，24h凋亡細(xì)胞

4、數(shù)達(dá)到高峰（凋亡指數(shù)：2h7.20±1.48、24h24.8±7.12、13.8±2.38）（p<0.01），而Ucf-101組各個(gè)時(shí)相點(diǎn)凋亡指數(shù)較窒息組均有明顯減少（凋亡指數(shù)：2h3.60±1.14、24h16.4±4.03、48h7.40±1.14）（p<0.01），但未恢復(fù)至對(duì)照組水平；（3）與對(duì)照組相比，窒息組腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)omi/HtrA2轉(zhuǎn)位率明顯增加（轉(zhuǎn)位率：2h15.00±0.58、24h30.92±0.48、48h2

5、2.08±0.53），差異有顯著性（P<0.01）；與窒息組相比，Ucf-101組Omi/HtrA2轉(zhuǎn)位率明顯降低（轉(zhuǎn)位率：2h10.15±0.51、24h19.12±0.46、48h14.30±0.52），差異有顯著性（P<0.01）；（4）與對(duì)照組相比，窒息組腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)omi/HtrA2 mRNA的表達(dá)明顯增加（mRNA表達(dá)量：2h1.17±0.03、24h1.84±0.03、48h1.45±0.03），差異有顯著性（P<0.