5-AzA-dc逆轉非小細胞肺癌細胞順鉑耐藥相關microRNA的篩選鑒定.pdf

1、研究背景:
　　順鉑是非小細胞肺癌(NSCLC)最主要的化療藥物，但易產生耐藥性，如何改變NSCLC耐藥性及耐藥逆轉機制研究是當前的熱點之一。我們前期研究表明，5-氮-2'-脫氧胞苷(5-Aza-dc)可逆轉NSCLC細胞的順鉑耐藥性，但具體機制不明。最近研究顯示，microRNA(miRNA)與腫瘤順鉑耐藥相關，而5-Aza-dc可影響腫瘤細胞的miRNA表達譜。因而我們推測:miRNA可能在5-Aza-dc誘導的NSCLC細胞

2、順鉑耐藥逆轉中發(fā)揮重要調控作用。本實驗通過檢測5-Aza-dc誘導前后的耐順鉑細胞株A549/DDP細胞中miRNA表達譜變化，及預測分析miRNA的靶基因，探討miRNA是否與5-Aza-dc誘導的NSCLC細胞順鉑耐藥逆轉相關，為深入研究5-Aza-dc逆轉順鉑耐藥的miRNA調控機制提供基礎。
　　研究目的:
　　探討miRNA是否與5-Aza-dc誘導的NSCLC細胞順鉑耐藥逆轉相關;初步篩選出調控5-Aza-dc逆

3、轉NSCLC細胞順鉑耐藥過程的相關miRNA及靶基因。
　　研究方法:
　　以MTT法檢測A549/DDP細胞對順鉑的耐藥指數及5-Aza-dc對A549/DDP細胞的耐藥逆轉作用。miRNA芯片技術檢測5-Aza-dc誘導A549/DDP細胞后miRNA表達譜差異;quantitative real-timePCR(RT-qPCR)驗證芯片結果。生物信息學方法預測miRNA的靶基因，并對靶基因進行GO分析及KEGG信號通路

4、分析。
　　結果:
　　1.A549細胞和A549/DDP細胞對順鉑的IC50分別為6.79±1.58μM，39.39±2.86μM，耐藥指數RI為5.80，該A549/DDP細胞鑒定為對順鉑耐藥的肺癌細胞株。無毒劑量20μM5-Aza-dc誘導后的A549/DDP細胞對順鉑的IC50下降為17.21±3.13μM，耐藥逆轉指數為2.29，20μM5-Aza-dc誘導對A549/DDP細胞有明顯的耐藥逆轉作用。
　　2

5、.總RNA質檢顯示樣本純度高，完整性好，符合miRNA芯片要求。miRNA芯片結果顯示經5-Aza-dc誘導細胞后有131條差異表達的miRNA，其中43條miRNA(27條上調，16條下調)表達差異倍數在2倍以上，兩個樣品芯片雜交信號值均在100以上。RT-qPCR結果顯示與miRNA芯片結果趨勢相似。
　　3.生物信息學預測了miRNA如miR-320a，let-7b，miR-548j的靶基因，并分析靶基因的生物學功能及相關信

6、號通路，從中初步篩選出可能介導5-Aza-dc逆轉NSCLC細胞順鉑耐藥的相關靶基因，如BCL2L1，SMAD2，E2F3等，并分析得到靶基因相關的MAPK信號通路，Wnt信號通路，JAK/STAT信號通路，PPAR信號通路，凋亡相關通路，藥物代謝等信號通路，提示miRNA可能通過影響這些通路活性參與調控5-Aza-dc誘導的NSCLC細胞順鉑耐藥逆轉。
　　結論:
　　miRNA可能與5-Aza-dc誘導的NSCLC細胞順