肺癌細胞對順鉑耐藥的FA-BRCA途徑機制研究.pdf

1、目的:通過檢測經(jīng)順鉑(DDP)處理后的肺癌細胞增殖抑制率變化,以及肺癌細胞FANCC、FANCF、FANCLmRNA和蛋白表達水平的變化,研究FA/BRCA途徑的DNA損傷修復功能在肺癌細胞對DDP耐藥機制中的作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)肺癌細胞株A549、Calu-1和SK-MES-1,采用CCK-8法分別測定經(jīng)不同濃度DDP處理三個肺癌細胞株24h、48h后的細胞增殖抑制率。用不同濃度DDP處理肺癌細胞后,收集細胞,分別提取

2、總RNA和總細胞裂解物,采用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)(QRT-PCR)測定三個肺癌細胞株中的FANCC、FANCF、FANCLmRNA表達,應用Westemblotting檢測它們的蛋白表達。
　　 結(jié)果:(1)肺癌細胞A549和Calu-1的細胞增殖抑制率均隨DDP濃度和作用時間的不同而變化,呈劑量依賴性(P＜0.05)和時間依賴性(P＜0.05),細胞Calu-1、SK-MES-1的半數(shù)抑制濃度(IC50)明顯高于細胞A

3、549。
　　 (2)用不同濃度DDP處理肺癌細胞A54924h后,與對照組相比,FANCCmRNA表達明顯降低(P＜0.05),但在10μg/ml和20μg/ml濃度DDP處理48h后,FANCCmRNA表達明顯增高(P＜0.05);肺癌細胞A549除在10μg/ml濃度DDP處理24h后FANCF和FANCLmRNA表達水平增高外,2.5-5μg/ml和20μg/ml濃度DDP時FANCF和FANCLmRNA呈無變化和低表達

4、(P＜0.05)。肺癌細胞Calu-1經(jīng)不同濃度DDP處理后的FANCC、FANCF和FANCLmRNA表達水平先增高后降低(P＜0.05)。用不同濃度DDP處理肺癌細胞SK-MES-124h后,FANCCmRNA表達水平先增高后降低(P＜0.05),但在5μg/ml和10μg/ml濃度DDP處理48h后,FANCCmRNA表達明顯增高(P＜0.05);在5-10gg/ml濃度的DDP處理24h及48h后,FANCF和FANCLmRNA

5、表達明顯增高(P＜0.05)。
　　 (3)肺癌細胞A549中的FANCC、FANCF和FANCL蛋白表達水平隨DDP濃度增高呈進行性降低。而肺癌細胞Calu-1的FANCF蛋白表達水平在DDP濃度5-10gg/ml范圍內(nèi)較對照組明顯增高。肺癌細胞SK-MES-1的FANCC、FANCF蛋白表達水平在DDP濃度5-20μg/ml范圍內(nèi)較對照組明顯地增高。
　　 結(jié)論:肺癌細胞Calu-1、SK-MES-1對DDP的耐藥性