沒食子酸通過大鼠GST促進(jìn)鹵代芳香烴類毒物的代謝.pdf

1、目的:誤食水果和蔬菜中殘留農(nóng)藥對人體帶來的毒害作用嚴(yán)重影響著人民的身體健康。近年來，如何解除鹵代芳香烴類農(nóng)藥的毒副作用的研究倍受關(guān)注。正常機(jī)體內(nèi)谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)能催化機(jī)體內(nèi)鹵代芳香烴類毒物與還原性谷胱甘肽(GSH)發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，增加水溶性而排出體外發(fā)揮解毒的功效。任何增加體內(nèi)酶活性的因素均有利于促進(jìn)毒物的代謝排出。葡萄、茶葉等果蔬品種富含沒食子酸，有文獻(xiàn)報道沒食子酸具有針對有機(jī)毒物的解毒作用，但解毒機(jī)制不明確，相關(guān)的研究報道較

2、少。本文從體內(nèi)、體外代謝酶動力學(xué)研究這一新的視角出發(fā)，以大鼠為研究對象，探索沒食子酸是否能夠通過影響機(jī)體內(nèi)解毒酶(GST)的活性，從而改變體內(nèi)鹵代芳香烴類毒物的代謝速率，揭示其解毒排毒分子機(jī)制，為保障人們健康飲食，增強(qiáng)體質(zhì)，提升機(jī)體解毒排毒的能力提供重要的理論指導(dǎo)。
　　方法:首先建立體外鼠肝微粒體中GST評價的孵育體系及酶活性測定HPLC分析方法，求算Vmax、Km及代謝清除率(CLint)等動力學(xué)參數(shù)，用于分析沒食子酸對GST

3、酶的動力學(xué)的影響，并對相關(guān)分子機(jī)制進(jìn)行研究。通過IC50(.)Ki等參數(shù)評價沒食子酸對以1-氯-2，4-二硝基苯(CDNB)為代表的毒物的體外代謝的影響，初步判斷二者發(fā)生相互作用的模式為體內(nèi)實驗奠定基礎(chǔ)。其次建立大鼠體內(nèi)藥物代謝評價體系，創(chuàng)建以DCNB為探針底物測定血藥濃度的氣相色譜分析方法，通過DAS3.2.1繪制DCNB的藥時曲線并計算其動力學(xué)參數(shù)，用于分析沒食子酸對體內(nèi)鹵代芳香烴類毒物的代謝的影響。為了進(jìn)一步探查沒食子酸在大鼠體內(nèi)

4、對GST的綜合影響，采用Western Blot方法考察了肝、腎、腸中mGST-1的蛋白表達(dá)，以期全面分析評價沒食子酸在體內(nèi)對GST的整體影響結(jié)果。
　　結(jié)果:大鼠肝微粒體GST的體外動力學(xué)分析顯示，GST酶的Vmax為85.45 nmol·min-1·mg protein-1; Km為15.09μmol·L-1;Clint為5.66 mL·min-1·mg protein-1。沒食子酸在體外明顯存在非時間依賴性抑制GST酶活性(

5、IC50=14.79μM)。經(jīng)超速離心和加入10Km的CDNB后，酶活性得到恢復(fù)，Ki為9.49μM。表明在體外沒食子酸是GST中等強(qiáng)度抑制劑，屬于可逆性抑制中的混合型機(jī)制。顯示可能存在降低CDNB等毒物的代謝作用。體內(nèi)實驗表明，沒食子酸干預(yù)的實驗組與對照組相比AUC0-∞從10363.5±1945.6降低到7075.1±1433.2。而實驗組CL/F(14.1±3.4)明顯高于對照組（9.6±2.3）。在蛋白表達(dá)分析實驗中，沒食子酸干

6、預(yù)的實驗組中肝、腎、腸的GST蛋白表達(dá)明顯強(qiáng)于對照組。
　　結(jié)論:本文首次從Ⅱ相代謝酶的動力學(xué)分析角度，考察了沒食子酸通過對GST酶動力學(xué)的影響而發(fā)揮其對鹵代芳香烴類農(nóng)藥的解毒機(jī)制。揭示了沒食子酸在體外雖然具有對GST的抑制作用，但在大鼠體內(nèi)其可以在各器官中通過大量誘導(dǎo)GST表達(dá)，增加體內(nèi)酶的絕對含量達(dá)到促進(jìn)對鹵代芳香烴類農(nóng)藥的代謝清除效果。從而有效發(fā)揮沒食子酸解毒作用。提示日常生活中多食用富含沒食子酸的食物能有效加快肌體對農(nóng)藥殘