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文檔簡介
1、目的:研究表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)體外α-葡萄糖苷酶抑制活性及體內的降血糖作用,初步探討在降血糖方面的作用機制。方法:①分別以麥芽糖和PNPG 為底物,采用葡萄糖氧化酶法和PNPG 法,測定EGCG 酶活抑制率及半數抑制濃度(IC50)值。再以麥芽糖為底物,建立離體小腸評價體系;測定其在該反應體系下的酶活抑制率及半數抑制濃度(IC50)值。以阿卡波糖作為陽性對照藥,比較不同底物及酶源對EGCG 抑制酶活的影響。按照Linew
2、eaver-Burk 作圖法,判斷抑制作用類型。體外實驗與十五種中草藥比較對α-葡萄糖苷酶抑制活性大小。②采用高脂高糖飼料連續(xù)10 周喂養(yǎng),誘導產生糖調節(jié)受損大鼠模型。以阿卡波糖作為陽性對照,通過口服葡萄糖耐量實驗,觀測空腹血糖、餐后血糖、胰島素水平、血清總膽固醇和甘油三酯的變化,并計算胰島素抵抗指數。用劑量分別為0.2、0.7和1.0 g/kg.d 連續(xù)灌胃3天,進行麥芽糖負荷實驗。并以20、50、200mg/kg.d 三個劑量對大鼠
3、連續(xù)灌胃6 周,分別于灌胃第2和4 周進行麥芽糖耐量實驗,以觀測EGCG 對大鼠空腹血糖及餐后血糖的影響。實驗結束時,處死大鼠取其肝臟、腎臟、心臟和脂肪等,分別計算各臟器指數;同時,測定空腹血糖、血清總膽固醇、甘油三酯、高密度和低密度脂蛋白膽固醇、肝糖原、肌糖原和肌酐等指標。結果:①本研究最終確定酶濃度為0.5mg/ml和麥芽糖濃度為0.06mol/L 為體外和離體小腸酶最適反應體系;測定EGCG 對兩種底物的IC50 值分別為0.15
4、0 mg/ml和2.594mg/ml;對離體小腸酶的IC50值為0.837mg/ml。并且是酵母α-葡萄糖苷酶的非競爭抑制劑,其Km=0.1518mol/L,Ki=0.4003mg/ml;其在體外的α-葡萄糖苷酶抑制活性強于十五種中草藥。②短期改善糖調節(jié)受損大鼠的餐后血糖及糖耐量作用不明顯,第2 周時,觀測保護效果。實驗結束時,表沒食子兒茶素沒食子酸酯的中、高劑量組(50、200mg/kg.d)的大鼠空腹血糖、血清總膽固醇、甘油三酯、低
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