非聚焦超聲對(duì)圓窗膜通透性的影響及其在鼓室藥物投放中的安全性和有效性研究.pdf

1、目的:
　　應(yīng)用聽性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response，ABR)、耳蝸熒光染色等方法觀察低強(qiáng)度的非聚焦超聲(Non-focused ultrasound，NFU)作用于豚鼠圓窗膜在輔助經(jīng)鼓室—內(nèi)耳給藥中的安全性。應(yīng)用液相質(zhì)譜法檢測(cè)豚鼠外淋巴液中的藥物濃度，觀察NFU對(duì)圓窗膜的促滲作用及其藥代動(dòng)力學(xué)改變。進(jìn)一步明確NFU輔助經(jīng)鼓室—內(nèi)耳給藥的有效性，以期探索該技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值與可行性。
　　方法

2、:
　　1、聽覺電生理測(cè)試:選取健康豚鼠，先行測(cè)量ABR閾值和Ⅲ波潛伏期，隨后分組接受不同強(qiáng)度和時(shí)間的NFU照射，完成后30分鐘再次接受ABR檢查。對(duì)照射前后的ABR閾值和Ⅲ波潛伏期進(jìn)行比較，了解有無聽力損害發(fā)生。
　　2、耳蝸毛細(xì)胞熒光染色觀察:將豚鼠分組接受不同強(qiáng)度的NFU短時(shí)間照射，隨后取出聽泡，對(duì)耳蝸進(jìn)行AO/EB染色，基底膜鋪片，熒光顯微鏡下觀察胞核的染色，了解細(xì)胞受損的情況。
　　3、外淋巴高效液相質(zhì)譜儀分

3、析:首先建立液相質(zhì)譜儀濃度-面積曲線。在豚鼠的聽泡內(nèi)注入地塞米松溶液，并使用不同強(qiáng)度的NFU照射聽泡。10分鐘后取出聽泡，提取外淋巴液進(jìn)行液相質(zhì)譜檢測(cè)，計(jì)算濃度并分組比較，分析NFU照射對(duì)外淋巴液中藥物濃度的影響。
　　結(jié)果:
　　1、電生理檢查發(fā)現(xiàn)，在本研究設(shè)定強(qiáng)度下(1.0-3.5 W/cm2)1MHz的NFU照射1-3min后，豚鼠ABR反應(yīng)閾、潛伏期與照射前相比并未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的改變(p＞0.05)。
　　2

4、、耳蝸基底膜鋪片熒光染色觀察，1-3.5W/cm2強(qiáng)度下1MHz的NFU照射3min后，豚鼠耳蝸頂回、中回與底回均未見毛細(xì)胞明顯受損，與對(duì)照組比較，毛細(xì)胞損傷的數(shù)量未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差異(p＞0.05)。
　　3、根據(jù)液相質(zhì)譜儀的檢測(cè)結(jié)果，照射強(qiáng)度為2W/cm2組外淋巴液的平均藥物濃度為213.07ng/ml，3W/cm2組的平均濃度為568.5ng/ml，3.5W/cm2組的平均濃度為1635.61ng/ml，而空白對(duì)照組的平均

5、濃度為86.57ng/ml。各組之間比較，p值均＜0.05，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯，最大濃度差可達(dá)18.89倍。
　　結(jié)論:
　　1、3.5 W/cm2強(qiáng)度以下的NFU短時(shí)程照射不會(huì)造成豚鼠ABR的顯著改變。短時(shí)程、低強(qiáng)度的非聚焦超聲聽泡照射這一無損傷技術(shù)對(duì)豚鼠的聽力是安全的。
　　2、低于3.5W/cm2強(qiáng)度的非聚焦超聲短時(shí)暴露未見導(dǎo)致豚鼠毛細(xì)胞的形態(tài)學(xué)損傷。
　　3、非聚焦超聲輔助可以有效提高圓窗膜的通透性，這一促滲