超聲造影對胎盤屏障通透性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景： 超聲造影劑和超聲造影技術(shù)的發(fā)展為超聲觀察組織器官的微循環(huán)和灌注創(chuàng)造了條件，近年的研究表明，超聲造影可以為婦科及胎盤某些疾病的診斷提供比常規(guī)超聲更豐富的信息，并且對某些胎盤疾病及婦科疾病的診斷有很大的幫助。 超聲造影劑的微泡大小與紅細(xì)胞相似，在正常情況下不能通過胎盤屏障。有學(xué)者將造影劑用于妊娠獼猴實(shí)驗(yàn)胎盤研究，注射超聲造影劑后進(jìn)行胎盤循環(huán)及子宮動(dòng)脈、胎猴臍動(dòng)脈和大腦中動(dòng)脈的觀察。造影劑使胎盤母體面血管顯示增強(qiáng)，而對

2、胎猴循環(huán)無明顯影響。在對69例孕晚期單胎孕婦行超聲造影(Levovist)檢測子宮-胎盤血循環(huán)，結(jié)果亦顯示孕晚期應(yīng)用超聲造影劑檢測子宮胎盤血循環(huán)未對母體及胎兒造成損害。但這些研究并未深入到胎盤的顯微及超微結(jié)構(gòu)，也沒有對胎盤屏障的通透性做進(jìn)一步的研究。 現(xiàn)有研究表明，由于造影劑微泡的空化核作用，平均強(qiáng)度較低的診斷超聲亦可以產(chǎn)生空化效應(yīng)，在生物體內(nèi)表現(xiàn)為聲孔效應(yīng)，使細(xì)胞膜通透性改變。超聲造影劑在超聲波的作用下還可引起血腦屏障、毛細(xì)血

3、管通透性改變。診斷級(jí)超聲輻照下，超聲波作用于微泡的空化效應(yīng)可使體外培養(yǎng)的單層細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞膜短暫性通透性增加，使得大分子物質(zhì)能夠進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)。近年來，超聲造影在婦科疾病診斷中的應(yīng)用獲得了良好的效果，但是在臨床應(yīng)用中，診斷劑量的超聲輻照造影劑微泡是否會(huì)通過空化效應(yīng)使胎盤屏障通透性增加，進(jìn)而對孕婦及胎兒產(chǎn)生影響，目前尚未見報(bào)道。 研究目的： 1.應(yīng)用CPS技術(shù)觀察造影劑在胎盤的灌注情況； 2.了解不同機(jī)械指數(shù)超聲造影對

4、胎盤屏障通透性的影響； 3.觀察胎盤在超聲造影后超微結(jié)構(gòu)的變化。 方法： 1.對8只孕鼠進(jìn)行超聲造影，MI0.3連續(xù)輻照5min，造影劑量0.1ml/kg。利用超聲造影連續(xù)脈沖對比(Contrastpulsesequencing，CPS，)技術(shù)及其配套的灌注定量分析軟件得到胎盤超聲造影各參數(shù)值和時(shí)間-強(qiáng)度曲線。 2.72只孕鼠隨機(jī)分為9組，每組8只，超聲輻照聯(lián)合造影劑組按MI=0.13，1.0，1.4及連

5、續(xù)輻照(5min)和間歇輻照(輻照10s，間歇10s，共5min)分為6組、單純微泡組、單純超聲組、空白對照組，造影劑量1ml/kg。利用。EB在綠色激發(fā)光照射下，自顯紅色熒光的特性，用熒光顯微鏡觀察孕鼠胎盤及胎鼠的染色情況。 3.60只孕鼠隨機(jī)分為10組，每組6只，超聲輻照聯(lián)合造影劑組按MI=0.13，1.0，1.4及連續(xù)輻照(5min)和間歇輻照(輻照10s，間歇10s，共5min)分為6組、單純超聲組按連續(xù)輻照(5min)

6、和間歇輻照(輻照10s間歇10s，共5min)分為2組、單純微泡組、對照組，造影劑量1ml/kg。對胎盤及胎鼠進(jìn)行EB淬取，用分光光度儀比色，測量其光密度值并計(jì)算出EB濃度及含量。 4.36只孕鼠隨機(jī)分為6組，每組6只，微泡聯(lián)合超聲輻照組按MI=0.13，1.0，1.4分3組，單純超聲組MI為1.4，單純微泡組，空白對照組，輻照時(shí)間5min，造影劑量1ml/kg。用硝酸鑭作為示蹤劑，透射電鏡下觀察胎盤及胎鼠的鑭顆粒沉積情況，從超

7、微結(jié)構(gòu)上了解超聲造影對胎盤屏障影響。 結(jié)果： 1.用CPS技術(shù)對超聲造影在胎盤的灌注進(jìn)行定量分析，觀測到胎盤有明顯的造影劑動(dòng)態(tài)增強(qiáng)過程，而胎鼠沒有造影劑顯影。時(shí)間-強(qiáng)度曲線顯示，子宮肌壁的造影劑到達(dá)時(shí)間和達(dá)峰值強(qiáng)度時(shí)間比胎盤早約3s左右(p＜0.01)，但峰值強(qiáng)度相近(p＞0.05)； 2.大體觀察結(jié)果：注射EB后即可見動(dòng)物的全身各組織迅速藍(lán)染。注射造影劑，給予不同MI的超聲輻照后取出胎盤及胎鼠，可見胎盤被染成深

8、藍(lán)色，而胎鼠未被染色呈半透明淺粉色； 3.熒光顯微鏡觀察結(jié)果：在綠色激發(fā)光狀態(tài)下，EB呈現(xiàn)鮮艷明亮的紅色熒光。對照組及處理組胎盤組織，均可見明顯的紅色熒光斑塊，從母體側(cè)到胎兒側(cè)呈遞減趨勢，而胎鼠組織內(nèi)未見紅色熒光顯像； 4.組織中EB定量測定結(jié)果：胎盤在不同機(jī)械指數(shù)的超聲波輻照聯(lián)合造影劑時(shí)，EB含量明顯高于對照組(p＜0.01)，而單純超聲、單純微泡組與對照組無明顯區(qū)別(p＞0.05)。胎鼠無論在超聲波聯(lián)合造影劑組及單純

9、超聲、單純微泡組EB含量與對照組均無明顯區(qū)別(P＞0.05)。同一組別中，胎盤的EB含量明顯高于胎鼠(p＜0.01)； 5.透射電鏡下觀察到對照組及單純微泡組胎盤只在細(xì)胞間隙可見硝酸鑭顆粒沉積，單純超聲及微泡聯(lián)合超聲輻照各組除細(xì)胞間隙，在合體滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿內(nèi)亦可見鑭顆粒的沉積。但微泡聯(lián)合超聲輻照各組，不同的MI，電鏡結(jié)果沒有明顯差別。 6.單純微泡組胎盤超微結(jié)構(gòu)與對照組無明顯差別。單純超聲組及微泡聯(lián)合超聲輻照組胎盤合體滋養(yǎng)