不同齲敏感者變異鏈球菌臨床分離株兩種生存狀態(tài)蛋白表達(dá)研究.pdf

1、福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文不同齲敏感者變異鏈球菌臨床分離株兩種生存狀態(tài)蛋白表達(dá)研究姓名：邱明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：黃曉晶20090401不同齲敏感者變異鏈球菌臨床分離株兩種生存狀態(tài)蛋白表達(dá)研究是表面相關(guān)蛋白表達(dá)差異，從而探討兩菌株間致齲性存在差異的原因。選擇表面相關(guān)蛋白表達(dá)作為本研究的重點(diǎn)，是由于變鏈菌的大部分致齲毒力因子均分布于表面，其中涉及了決定其致齲力的各個(gè)方面，即細(xì)菌粘附、生物膜形成、菌細(xì)胞代謝碳水化合物能

2、力及細(xì)菌對(duì)不斷波動(dòng)環(huán)境的適應(yīng)能力四個(gè)方面。本研究包括兩部分實(shí)驗(yàn)：第一部分變異鏈球菌臨床株體外生物膜形成情況及蛋白表達(dá)初步分析目的：了解變鏈菌臨床株體外生物膜的形成規(guī)律，及生物膜成熟初期的蛋白表達(dá)情況。方法：(1)采用微孔板培養(yǎng)，染色、分光光度測(cè)定法(A630)繪制體外不同pH條件下(pH7050)593號(hào)、18號(hào)菌株以及變鏈菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC25175)的生物膜生長(zhǎng)曲線。(2)采用十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)技術(shù)，

3、分析標(biāo)準(zhǔn)株在不同時(shí)間點(diǎn)(16、18、20、22、24小時(shí))生物膜中菌體可溶性蛋白表達(dá)情況。結(jié)果：(1)體外變鏈菌各株在pH50時(shí)均不能形成生物膜；pH70條件下的細(xì)菌生物膜形成表現(xiàn)為緩慢的非線性生長(zhǎng)，1224小時(shí)生物膜開(kāi)始成熟，2436小時(shí)間出現(xiàn)一相對(duì)的生長(zhǎng)停滯期；pH50對(duì)已形成12小時(shí)的變鏈菌生物膜生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，但經(jīng)歷12小時(shí)的酸休克后各菌株的生物膜均能恢復(fù)生長(zhǎng)。(2)16～24小時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)株生物膜菌體可溶性蛋白的SD

4、SPAGE圖譜一致，未見(jiàn)特異表達(dá)和高表達(dá)的蛋白條帶。結(jié)論：(1)變鏈菌在體外pH70時(shí)于12“24小時(shí)形成穩(wěn)定的生物膜，該生物膜能抵抗一定程度的酸(pH50)攻擊，而浮游狀態(tài)的細(xì)菌則不能。(2)16～24小時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)變鏈菌生物膜菌體可溶性蛋白表達(dá)無(wú)差異。第二部分浮游和生物膜狀態(tài)變異鏈球菌臨床株表面相關(guān)蛋白表達(dá)差異分析目的：(1)分析變鏈茵臨床株在兩種不同生存狀態(tài)(浮游和生物膜狀態(tài))表面相關(guān)蛋白表達(dá)的差異。(2)分析生物膜狀態(tài)不同變鏈菌

5、臨床株(593和18號(hào)菌株)表面相關(guān)蛋白表達(dá)的差異。方法：采用Homer法提取593號(hào)和18號(hào)菌株在浮游和生物膜狀態(tài)下的表面相關(guān)蛋白，經(jīng)SDSPAGE、二維電泳確定差異點(diǎn)，對(duì)差異點(diǎn)進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析得PMF，通過(guò)NCBInr數(shù)據(jù)庫(kù)檢索、分析、鑒定蛋白質(zhì)。結(jié)果：(1)相較于浮游狀態(tài)，生物膜狀態(tài)的593號(hào)和18號(hào)菌株SDSPAGE圖譜在575KDa和679KDa存在共同特異條帶，且在425KDa、385KOa和272KDa