感染濃核病毒的家蠶中腸差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、家蠶濃核病毒中國(guó)株(BmDNV-3)是我國(guó)蠶業(yè)上危害較大的病毒之一，是夏秋季養(yǎng)蠶中的常見(jiàn)病。家蠶中有部分品系對(duì)此病毒表現(xiàn)出完全抵抗，經(jīng)典遺傳學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，家蠶對(duì)BmDNV-3的抗性產(chǎn)生是由隱性單基因控制的。但其抗性產(chǎn)生的機(jī)制目前尚不清楚。本研究運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法研究了濃核病毒感染后家蠶中腸的蛋白表達(dá)譜；用差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法，比較了不同感受性家蠶品種在病毒感染后的24h、36h和48h中腸組織的差異蛋白；并分析了相關(guān)蛋白的基因結(jié)構(gòu)。

2、其結(jié)果如下： 1.通過(guò)雙向電泳技術(shù)對(duì)感染BmDNV-3后家蠶的中腸組織的總蛋白進(jìn)行了分離，利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(MAIDI-TOF/TOF MS、)對(duì)表達(dá)量較高的蛋白點(diǎn)進(jìn)行了肽質(zhì)量指紋圖譜分析，并對(duì)肽質(zhì)量指紋圖譜進(jìn)行了數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析。其結(jié)果是：家蠶中腸蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)雙向凝膠電泳和銀染后可以檢測(cè)出280個(gè)以上的蛋白點(diǎn)。對(duì)其中104個(gè)分離的較好的蛋白點(diǎn)進(jìn)行了MALDI-TOF MS鑒定，這些蛋白點(diǎn)均得到了較強(qiáng)的肽質(zhì)量指

3、紋信號(hào)峰，其中34個(gè)蛋白點(diǎn)得到了成功鑒定，包括大量的離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與熱休克蛋白等。 2.從不同感受性家蠶品種在病毒感染后各時(shí)間段的中腸組織的差異蛋白中獲得了部分抗性相關(guān)蛋白?？偟膩?lái)說(shuō)，不同時(shí)段得到的差異蛋白雖略有不同，但有一些蛋白在各個(gè)時(shí)段差異表現(xiàn)比較穩(wěn)定，這些蛋白是值得重視和研究的蛋白。例如，糖基轉(zhuǎn)移酶在各個(gè)時(shí)段的抗性品系中的表達(dá)量均高于感性品系。該酶是一種細(xì)胞膜表面蛋白，與細(xì)胞表面蛋白的糖基化有關(guān)。這一蛋白表達(dá)的差異可能意味著

4、細(xì)胞表面蛋白糖基化發(fā)生了改變。這與日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)的抗BmDNV-2品系細(xì)胞表面蛋白糖基化位點(diǎn)改變，導(dǎo)致宿主對(duì)病毒的敏感性發(fā)生改變的結(jié)果一致。但由于蛋白質(zhì)的糖基化需要多種糖基化酶的協(xié)同作用，此酶可能是蛋白糖基化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的一個(gè)節(jié)點(diǎn)蛋白。研究中還發(fā)現(xiàn)一些在應(yīng)激和機(jī)體處于高耗能狀態(tài)時(shí)表達(dá)升高的蛋白在抗性品系中有較高的表達(dá)。這說(shuō)明，與感性品系相比，抗性品系對(duì)于病毒的入侵產(chǎn)生了更強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)，這種增強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)可能在抵抗病毒入侵時(shí)起到了一定的防御作

5、用。 3.本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)抗性品系中腸組織中有BmDNV-3 VD1-orf 1基因產(chǎn)物，這一病毒非結(jié)構(gòu)蛋白的發(fā)現(xiàn)意味著該病毒確實(shí)可以在抗性品系中腸細(xì)胞中復(fù)制。 4.糖基轉(zhuǎn)移酶的基因分析通過(guò)電子克隆對(duì)家蠶糖基轉(zhuǎn)移酶基因進(jìn)行了拼接，并運(yùn)用并運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)家蠶糖基轉(zhuǎn)移酶基因進(jìn)行了初步分析，獲得了其保守結(jié)構(gòu)域及與其它物種的進(jìn)化關(guān)系。進(jìn)化樹(shù)分析表明，通過(guò)電子克隆得到的家蠶糖基轉(zhuǎn)移酶蛋白與其它昆蟲(chóng)的糖基轉(zhuǎn)移酶蛋白進(jìn)化關(guān)系較近，而