Ryanodine受體在觸發(fā)性室性心律失常發(fā)生中的作用.pdf

1、目的：惡性心律失常長期嚴(yán)重威脅人類的健康和生命,鈣穩(wěn)態(tài)失衡是病理心肌發(fā)生觸發(fā)性室性心律失常的重要機(jī)制。Ryanodine受體是調(diào)控胞內(nèi)鈣水平的關(guān)鍵蛋白,其功能受到鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ的磷酸化調(diào)節(jié)。本研究在組織水平和細(xì)胞水平兩個(gè)層面,分別對(duì)兩種病理心肌模型——兔兒茶酚胺敏感性室速(CPVT)模型和心肌肥厚模型進(jìn)行研究,觀察分別應(yīng)用KN-93(鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ抑制劑)和蘭尼堿(Ryanodine受體阻斷劑)進(jìn)行干預(yù)對(duì)上述模型心律失常發(fā)生的影響,并結(jié)

2、合分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果,探明Ryanodine受體在病理心肌觸發(fā)性室性心律失常發(fā)生中的作用,探討阻斷Ryanodine受體對(duì)心律失常的治療價(jià)值。
　　方法：研究內(nèi)容共分三個(gè)部分,具體如下:
　　(1)KN-93、蘭尼堿對(duì)兔CPVT模型左室心肌塊心律失常發(fā)生的影響:
　　將日本長耳兔隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組、模型組、KN-93組和蘭尼堿組。制備兔左室楔形心肌塊的灌流模型,同步記錄心內(nèi)、外膜動(dòng)作電位及跨壁心電圖。正常組灌流臺(tái)

3、氏液,模型組灌流咖啡因和異丙腎上腺素建立CPVT模型, KN-93組和蘭尼堿組預(yù)先給予各自藥物預(yù)灌,然后灌流咖啡因和異丙腎上腺素,觀察在快頻率程序刺激下各組觸發(fā)活動(dòng)和室性心動(dòng)過速的發(fā)生率。
　　(2)KN-93、蘭尼堿對(duì)兔心肌肥厚模型左室心肌塊心律失常發(fā)生的影響:
　　將日本長耳兔隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組(Sham組)、心肌肥厚組(LVH組)、心肌肥厚+KN-93組(KN-93組)和心肌肥厚+蘭尼堿組(蘭尼堿組)。LVH組、K

4、N-93組和蘭尼堿組均通過縮窄腹主動(dòng)脈建立兔心肌肥厚模型,Sham組僅游離腹主動(dòng)脈不進(jìn)行縮窄。8周后應(yīng)用超聲心動(dòng)圖證實(shí)心肌肥厚形成,制備兔左室楔形心肌塊的灌流模型。KN-93組和蘭尼堿組預(yù)先給予各自藥物預(yù)灌,然后觀察各組在異丙腎上腺素灌流和快頻率程序刺激下觸發(fā)活動(dòng)和室性心動(dòng)過速的發(fā)生率。灌流完畢后取左室心肌組織,應(yīng)用Western Blot檢測(cè)各組心肌Ryanodine受體總量及Ser2815位點(diǎn)磷酸化蛋白水平。
　　(3)KN-

5、93、蘭尼堿對(duì)兔心肌肥厚模型左室單個(gè)心肌細(xì)胞觸發(fā)活動(dòng)的影響:
　　將日本長耳兔通過縮窄腹主動(dòng)脈建立心肌肥厚模型,設(shè)立假手術(shù)組作為對(duì)照。8周后應(yīng)用超聲心動(dòng)圖證實(shí)心肌肥厚形成,采用酶解法分離左室心肌細(xì)胞,應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄動(dòng)作電位,觀察在異丙腎上腺素灌流和快頻率電刺激條件下,單個(gè)心肌細(xì)胞晚期后除極(DAD)和觸發(fā)活動(dòng)的發(fā)生率,以及預(yù)先分別灌流KN-93和蘭尼堿對(duì)肥厚心肌細(xì)胞DAD和觸發(fā)活動(dòng)發(fā)生率的影響。
　　結(jié)果：(1)在

6、兔CPVT模型左室心肌塊灌流實(shí)驗(yàn)中:對(duì)照組、模型組、KN-93和蘭尼堿組觸發(fā)活動(dòng)的發(fā)生率分別為0/10、10/10、4/10和2/10,多形性室速或室顫的發(fā)生率分別為0/10、9/10、2/10、1/10,KN-93組和蘭尼堿組均較模型組顯著降低(P<0.05)。
　　(2)在兔心肌肥厚模型左室心肌塊灌流實(shí)驗(yàn)中:Sham組、LVH組、KN-93組和蘭尼堿組觸發(fā)活動(dòng)的發(fā)生率分別為0/10、10/10、4/10、2/10,室性心動(dòng)過速

7、或室顫的發(fā)生率分別為0/10、9/10、3/10、1/10,KN-93組和蘭尼堿組均較LVH組顯著降低(P<0.05);LVH組Ryanodine受體總量及Ser2815位點(diǎn)磷酸化蛋白水平較Sham組增加(P<0.05),LVH組、KN-93組和蘭尼堿組Ryanodine受體總量無明顯差異,但KN-93組Ser2815位點(diǎn)磷酸化蛋白水平較LVH組減少(P<0.05)。
　　(3)在兔心肌肥厚模型左室單個(gè)細(xì)胞灌流實(shí)驗(yàn)中:Sham組、

8、LVH組、KN-93組和蘭尼堿組晚期后除極(DAD)的發(fā)生率分別為0/20、17/20、7/20和4/20,觸發(fā)活動(dòng)的發(fā)生率分別為0/20、12/20、4/20和2/20,KN-93組和蘭尼堿組均較LVH組顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：降低Ryanodine受體Ser2815位點(diǎn)的磷酸化水平或直接阻斷Ryanodine受體,均能有效抑制病理心肌的觸發(fā)性心律失常;Ryanodine受體在觸發(fā)性心律失常發(fā)生中起重要作用,有望成