免疫抑制對(duì)ST-239型MRSA毒力因子表達(dá)的影響效應(yīng)研究.pdf

1、目的：
　　研究不同免疫狀態(tài)下ST-239型MRSA毒力因子的表達(dá)情況，為結(jié)合宿主免疫狀態(tài)對(duì)金黃色葡萄球菌毒力因子基因表達(dá)的影響提供新的思路和依據(jù)。
　　方法：
　　將SPF清潔級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和模型組，每組12只，雌雄各半。以40mg/kg的環(huán)磷酰胺連續(xù)肌肉注射3天，造成大鼠免疫抑制，在此基礎(chǔ)上通過(guò)滴鼻方式滴入小劑量高濃度的新鮮MRSA菌懸液，連續(xù)滴注3天，造成免疫抑制MRSA定植模型。對(duì)照組將正常大

2、鼠直接鼻腔滴入小劑量高濃度的新鮮MRSA菌懸液。細(xì)菌定植一定時(shí)間后取大鼠鼻粘膜組織，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析體內(nèi)試驗(yàn)中，不同免疫狀態(tài)下大鼠鼻粘膜組織中分離的MRSA毒力因子在基因水平上的表達(dá)差異；同時(shí)處死各組動(dòng)物后，取模型組和對(duì)照組動(dòng)物的血清分別加入TSB培養(yǎng)基，以普通TSB培養(yǎng)基作對(duì)照，將MRSA在不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析不同培養(yǎng)條件下不同培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的MRSA毒力因子在基因水平上的表達(dá)差異。
　　

3、結(jié)果：
　　1.處于免疫抑制狀態(tài)的大鼠較正常大鼠，MRSA更容易在鼻粘膜定植；
　　2.與肌注環(huán)磷酰胺前比較，肌注環(huán)磷酰胺后3天、7天時(shí)，大鼠血液學(xué)檢查可見(jiàn)外周血WBC、PLT數(shù)量迅速下降，同時(shí)RBC、HGB亦明顯降低（P<0.01）；外周血中CD3+T,CD3+CD4+T,CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞比例明顯降低并且B淋巴細(xì)胞以及NK細(xì)胞的比例也明顯降低（P<0.01）。外周血血清中免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的含量明顯

4、下降（P<0.01）；
　　3.連續(xù)3次向大鼠鼻腔滴注小劑量高濃度的新鮮MRSA菌懸液，細(xì)菌定植一段時(shí)間后可穩(wěn)定存在鼻粘膜組織細(xì)胞內(nèi)外；
　　4.體內(nèi)試驗(yàn)毒力因子檢測(cè)結(jié)果表明，定植在模型組大鼠鼻粘膜組織中的MRSA毒力因子hla和spa的表達(dá)水平要高于對(duì)照組，（P<0.05)，其中目的基因spa的表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）；
　　5.體外試驗(yàn)毒力因子檢測(cè)結(jié)果表明，MRSA在不同環(huán)境下培養(yǎng)不同時(shí)間后，細(xì)菌毒力因子的

5、表達(dá)也存在一定的差異。培養(yǎng)至90min時(shí)，模型組與對(duì)照組毒力因子hla和spa的表達(dá)水平相對(duì)于培養(yǎng)0min時(shí)變化不明顯（P>0.05）；而在細(xì)菌培養(yǎng)至120min時(shí)，模型組hla基因的表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高（P<0.01），且spa基因的表達(dá)水平較對(duì)照組升高（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.當(dāng)宿主處于免疫抑制狀態(tài)時(shí)，可能通過(guò)促進(jìn)金黃色葡萄球菌毒力因子的表達(dá)增強(qiáng)金黃色葡萄球菌的致病力；
　　2.當(dāng)MRSA感染宿主