卒中后免疫抑制與核因子κB作用研究.pdf

1、背景:腦卒中的治療是神經(jīng)病學(xué)領(lǐng)域面臨的一項巨大挑戰(zhàn)。在全球，卒中是60歲以上人口第二大死亡原因，是15-59歲人口第五大死亡原因。在我國，每年有250萬新發(fā)腦卒中患者，腦卒中與惡性腫瘤、心血管系統(tǒng)疾病構(gòu)成三大致死原因，其中卒中患者致死率的首要原因是感染。近年來研究表明，中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷可使機體免疫功能受到抑制，增加機體感染率，這一現(xiàn)象與機體交感神經(jīng)系統(tǒng)激活存在密切關(guān)系。關(guān)于腦卒中發(fā)生后中樞神經(jīng)系統(tǒng)如何誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生反應(yīng)，目前并無定論，

2、主流思想認(rèn)為這一過程與下丘腦-垂體-腎上腺軸和交感神經(jīng)系統(tǒng)均有一定關(guān)系，兩條信號通路也有各自的依據(jù)，但都無法完全解釋卒中后免疫抑制發(fā)生的所有現(xiàn)象，近期在細(xì)胞與分子層次的研究證實環(huán)-磷酸腺苷活性增強可以誘發(fā)核因子κB活性的下降，而核因子κB正是機體中促炎抗炎因子的調(diào)控點，它的活性下降可以導(dǎo)致促炎抗炎因子的失衡進(jìn)而出現(xiàn)機體免疫受到抑制的現(xiàn)象，因此本次實驗著重探討卒中后免疫抑制與脾臟中環(huán)-磷酸腺苷、蛋白激酶A、核因子κB的關(guān)系。
　　目

3、的:探討環(huán)-磷酸腺苷、蛋白激酶A、核因子κB在卒中后免疫抑制中的變化。
　　方法:實驗分四組:假手術(shù)組、假手術(shù)+異丙腎上腺素組、MCAO組、MCAO+普萘洛爾組，每組8只大鼠，其中MCAO組與MCAO+普萘洛爾組采用成年雄性Sprague-Dawley大鼠制作大腦中動脈閉塞模型。MCAO+普萘洛爾組在模型制備后2h、14h、26h、38h、50h、62h腹腔注入交感神經(jīng)抑制劑普萘洛爾(10 mg/kg)，假手術(shù)+異丙腎上腺素組在行

4、假手術(shù)后2h、14h、26h、38h、50h、62h腹腔注入交感神經(jīng)激動劑異丙腎上腺素(10 mg/kg)，72h心臟采血5ml與取出脾臟，血液靜置半小時，4℃條件下3700r/min離心10min，留取血清，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定促炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子α(TNF-α)和抗炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-10(IL-10)水平，評價機體免疫狀態(tài)。采用競爭性酶聯(lián)免疫吸附法測定脾臟環(huán)-磷酸腺苷(cyclic adenosine monop

5、hosphate)和蛋白激酶A(Protein kinaseA)含量，采用Western blot法測定核因子κ B(NF-κ B p65)含量。
　　結(jié)果:與假手術(shù)組相比，假手術(shù)+異丙腎上腺素組、MCAO組、MCAO+普萘洛爾組的cAMP和PKA顯著上升(P＜0.01)，NF-κB p65含量降低(P＜0.05)，MCAO組與MCAO+普萘洛爾組的促炎因子TNF-α顯著下降(P＜0.01)，抗炎因子IL-10顯著上升(P＜0.0

6、1)，其中MCAO組變化更明顯;假手術(shù)+異丙腎上腺素組促炎因子有輕度下降(P＜0.05)，抗炎因子有顯著上升(P＜0.01);與MCAO組相比，MCAO+普萘洛爾組與異丙腎上腺素組的促炎因子TNF-α均上升(P＜0.01)，抗炎因子IL-10均下降(P＜0.01)，cAMP和PKA減少(P＜0.01)，NF-κB p65含量升高(P＜0.05);與治療組相比，異丙腎上腺素組cAMP和PKA減少(P＜0.01)，NF-κB p65含量無統(tǒng)