體內(nèi)外研究18β-甘草次酸對(duì)MDSC免疫抑制功能的影響.pdf

1、目的：肝細(xì)胞癌(Hepatocellular.carcinoma，HCC)是臨床過程中多見的惡性腫瘤，它的惡性程度高，難以控制，診療過程中不易被發(fā)現(xiàn)，病情進(jìn)展快速，對(duì)人們的健康影響嚴(yán)重。近年來，中國肝癌的預(yù)防和治療有了長足的發(fā)展，其中肝癌的免疫診療及預(yù)防的研究也不斷深入。最近研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在腫瘤模型小鼠的血液、脾臟和腫瘤中，都存在大量的髓系來源的抑制細(xì)胞(myeloid-derivedsuppressorcel1，MDSC)，而且在臨床

2、腫瘤患者中，對(duì)其血液和腫瘤組織進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大量的MDSC。MDSC的大量積累，抑制了機(jī)體免疫功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逃脫免疫細(xì)胞的攻擊，進(jìn)而使腫瘤發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。本文通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，研究18β-甘草次酸(GA)對(duì)肝癌微環(huán)境中MDSC增殖抑制的作用及其機(jī)理。為GA抗肝癌作用新靶點(diǎn)的闡明提供了新的思路，同時(shí)也為后續(xù)開展MDSC免疫學(xué)及細(xì)胞機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論支持。
　　實(shí)驗(yàn)方法：鼠源性肝癌細(xì)胞H22，用注射器將其打入BALB/

3、c雄性小鼠肝臟內(nèi)，建立小鼠原位模型，手術(shù)10天后斷頸處死小鼠。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過流式分選技術(shù)分選模型小鼠脾臟中MDSC細(xì)胞，GA處理MDSC24小時(shí)后，流式檢測MDSC精氨酸代謝酶1（Arg-1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)及活性氧(ROS)的表達(dá)，通過共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，流式細(xì)胞術(shù)檢測MDSC對(duì)T細(xì)胞抑制的影響及作用機(jī)制。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將動(dòng)物隨機(jī)分為三個(gè)組別:正常組、模型組、GA組。收集三組小鼠的脾臟、肝臟及腫瘤，通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測各組

4、小鼠脾臟和腫瘤中各免疫細(xì)胞的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：構(gòu)建小鼠原位肝癌模型并從脾臟中成功分選出MDSC;在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，GA均能下調(diào)MDSC中Arg-1、iNOS和ROS的表達(dá);MDSC能抑制T細(xì)胞的增殖，經(jīng)GA處理MDSC后，其能明顯抑制T細(xì)胞增殖。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，雖然GA組較模型組脾臟和腫瘤中MDSC及其亞型的表達(dá)均明顯上調(diào)，但MDSC功能中Arg-1、iNOS和ROS的表達(dá)是下調(diào)的。同時(shí)GA組中NK細(xì)胞的表達(dá)較模型組明顯升高。