奶粉中常見致病菌檢測(cè)的基因芯片的研制.pdf

1、食品中常見的致病菌是引起食物中毒的主要原因之一，可導(dǎo)致多種疾病發(fā)生，嚴(yán)重威脅著人們的健康。快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)食品中的致病菌是有效預(yù)防和控制病原菌感染的前提條件。本文的研究目的是建立一種利用寡核苷酸芯片快速檢測(cè)奶粉中常見致病菌的方法，檢測(cè)的目的菌株包括坂崎腸桿菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)酸克雷伯氏菌、沙門氏菌和志賀氏菌。
　　 我們通過對(duì)坂崎腸桿菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)酸克雷伯氏菌、沙門氏菌16S-23S rDN

2、A間區(qū)以及志賀氏菌的ipaH基因的分析，確定用于檢測(cè)的靶基因?yàn)?6S-23S rDNA間區(qū)和ipaH基因。在16S rDNA的末端和23S rDNA的前端設(shè)計(jì)通用引物，而在間區(qū)可變區(qū)設(shè)計(jì)特異性探針。用Primer premier5.0軟件分別設(shè)計(jì)出6種致病菌的特異探針，同時(shí)設(shè)計(jì)了所有細(xì)菌的正對(duì)照探針及陰性對(duì)照探針，將探針poly（T）加尾后固定在載玻片上，制成寡核苷酸芯片；提取細(xì)菌DNA后PCR擴(kuò)增，純化擴(kuò)增產(chǎn)物去除引物，用下游引物進(jìn)行

3、單鏈PCR，同時(shí)摻入Cy3_dUTP標(biāo)記反義鏈，熒光標(biāo)記后的產(chǎn)物和寡核苷酸芯片上的探針雜交，洗滌后用熒光掃描儀檢測(cè)雜交信號(hào)。對(duì)檢測(cè)體系進(jìn)行了特異性、靈敏性及模擬樣品實(shí)驗(yàn)。
　　 通過148株菌包括104株代表菌株和39臨床菌株對(duì)檢測(cè)體系進(jìn)行了測(cè)試，均顯示了該寡核苷酸芯片的高特異性；該方法可最低檢測(cè)出103CFU/mL的純菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明運(yùn)用寡核苷酸芯片技術(shù)所建立的檢測(cè)方法準(zhǔn)確、可靠、實(shí)用性強(qiáng)，本文所建立的檢測(cè)方法為今后在食源性致