免疫組化定位角蛋白、α-SMA、Na+-K+-ATPaseα-β、NKCC1和AQP5在外泌汗腺的表達.pdf

1、目的：
　　人體外泌汗腺由分泌部和導(dǎo)管部組成，它們在形態(tài)和功能上有所區(qū)別，為了更好地了解這兩部分結(jié)構(gòu)，我們使用雙重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)染色的方式，檢測與汗腺結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)的角蛋白和α平滑肌肌動蛋白（?-SMA）的具體定位來區(qū)分兩者，同時，為了進一步研究人體汗腺再生修復(fù)的機制，我們首先需要定位在汗腺各種生理活動中的重要功能蛋白。由于Na+-K+-ATPaseα/β（鈉鉀ATP酶α/β亞單位)，Na+-K+-2Cl-cotransport

2、er1（鈉鉀氯協(xié)運體-1）和Aquaporin-5（水通道蛋白-5）在汗腺正常生理功能中發(fā)揮著重要作用，本研究針對這4個蛋白也進行了定位研究。
　　方法：將獲得的人正常皮膚標(biāo)本進行一系列處理，制成石蠟包埋標(biāo)本，進行切片，切片厚度為3μm，首先行HE染色，并進行以下處理：
　　1、使用雙重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)染色的方式，用配對方式檢測以下蛋白：CK8/CK5；CK8/CK14；CK7/CK5；CK7/CK14；α-SMA/CK5；

3、α-SMA/CK14；
　　2、采用過氧化物酶免疫組織化學(xué)染色（DAB）方法，檢測以下蛋白：Na+-K+-ATPaseα/β（鈉鉀ATP酶α/β亞單位)，Na+-K+-2Cl-cotransporter1（鈉鉀氯協(xié)運體-1）和aquaporin-5（水通道蛋白-5）。分別在熒光顯微鏡和光學(xué)顯微鏡下觀察并拍攝記錄結(jié)果。
　　結(jié)果：
　?。?）雙重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)染色結(jié)果顯示，人體外泌汗腺分泌部CK5＋/CK7＋，CK5＋

4、/α-SMA＋，CK14＋/CK7＋，CK14＋/α-SMA＋；
　?。?）人體外泌汗腺導(dǎo)管部：CK5＋/CK7－，CK5＋/α-SMA—，CK14＋/CK7－，CK14＋/α-SMA－；
　　（3）Na+-K+-ATPaseα主要表達部位有：上皮基底層和基底層以上的細胞膜、汗腺分泌部的基底外側(cè)膜、汗腺導(dǎo)管部的外層細胞和基底外側(cè)膜；
　?。?）Na+–K+-ATPaseβ的表達部位，除了不在直導(dǎo)管和上皮表達之外，其他表

5、達部位跟Na+–K+-ATPaseα一致；
　　（5）NKCC1只在汗腺分泌部的基底外側(cè)膜表達；
　?。?）AQP5在汗腺分泌部上皮細胞頂端膜部位強表達，胞漿弱表達。
　　結(jié)論：
　?。?）利用CK5/CK7/CK8/CK14和α-SMA等抗原雙重免疫熒光組織化學(xué)染色的方法可以清楚辨別人體外泌汗腺的分泌部和導(dǎo)管部不同結(jié)構(gòu)，有助于進一步的研究；
　?。?）Na+-K+-ATPaseα/β（鈉鉀ATP酶α/β亞