類sorcin蛋白的表達、純化、抗體制備及免疫組化研究.pdf

1、本實驗從日本七鰓鰻(Lampetra japonica)口腔腺中調(diào)取出編碼類sorcin蛋白的目的基因L249，克隆到pET23b載體中后，對類sorcin蛋白進行原核及真核誘導(dǎo)表達，利用親和層析進行蛋白純化，以純化后的類sorcin蛋白作為抗原，制備兔抗七鰓鰻多克隆抗體。用ELISA的方法測出效價后，應(yīng)用該多克隆抗體，在七鰓鰻的主要免疫器官中進行類sorcin蛋白的免疫組化定位，以便研究免疫器官的結(jié)構(gòu)和類sorcin蛋白的分布情況，為

2、進一步研究免疫器官在類sorcin蛋白活性中的作用和應(yīng)用類sorcin蛋白研制藥用新靶點奠定理論基礎(chǔ)。 類sorcin蛋白的誘導(dǎo)表達結(jié)果表明：類sorcin蛋白在大腸桿菌BL21菌株和 Rosetta-BL21 菌株中均為包涵體過表達形式。并且，類 sorcin 蛋白在Rosetta-BL21 菌株中的表達量要比在 BL21 菌株中大。另外，在酵母中尚未看到類sorcin蛋白的真核表達形式。 用BCA法測定所得的誘導(dǎo)表達

3、蛋白濃度的結(jié)果表明：純化后的類sorcin蛋白的濃度可達到1.16 mg/mL。用ELISA方法檢測兔抗七鰓鰻多克隆抗體的結(jié)果表明：所制備的抗體效價值比較高，可達到1∶12000。用Western-blot的方法對類sorcin蛋白進行定位分析的結(jié)果表明：從口腔腺中提取出的天然蛋白的條帶位置和純化后的重組蛋白的位置并不完全一致。 對類sorcin蛋白進行免疫組化研究的分析結(jié)果表明：日本七鰓鰻消化系統(tǒng)組織形態(tài)結(jié)構(gòu)特點與其特殊的進食

4、方式和進化地位密切相關(guān)。類sorcin蛋白在日本七鰓鰻的腸、心臟、肝臟、生殖腺及口腔唾液腺等免疫器官中均有分布，并且分布的表達量各不相同。其中在心臟中的分布量很豐富，這與sorcin蛋白的主要活性之一：影響心肌細胞的興奮——收縮偶聯(lián)是相關(guān)的。正常心肌細胞中，sorcin與細胞內(nèi)鈣釋放通道RyR能廣泛協(xié)同定位，而在心肌病的心肌細胞中，這種協(xié)同定位的能力被破壞。目前研究人員通過對心肌蛋白進行協(xié)同定位和體外結(jié)合實驗，已經(jīng)明確sorcin能夠完