芥子氣染毒小鼠皮膚基底細(xì)胞的增殖動(dòng)力學(xué)行為研究.pdf

1、我們開展了該項(xiàng)研究,以期了解芥子氣損傷皮膚基底細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)的變化特點(diǎn),并為從改善干細(xì)胞微環(huán)境、促進(jìn)干細(xì)胞的增殖分化角度,探索促進(jìn)芥子氣損傷皮膚愈合的新途徑以及干細(xì)胞移植療法的建立奠定了基礎(chǔ),具體工作如下:1.芥子氣對(duì)小鼠皮膚基底細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)的影響 該研究采用胰蛋白酶消化法急性分離小鼠耳廓表皮細(xì)胞,通過免疫組化及流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測(cè)證實(shí)分離得到的細(xì)胞主要是β1整合素陽性細(xì)胞,即表皮基底細(xì)胞.采用PI染色流式細(xì)胞術(shù)觀察了芥子氣染毒后小鼠

2、表皮基底細(xì)胞增殖周期的時(shí)效及量效關(guān)系.當(dāng)染毒濃度為32mg/mL芥子氣時(shí),48h之前細(xì)胞周期未發(fā)生明顯的改變,而染毒后48h出現(xiàn)S及G<,2>/M期細(xì)胞增多的現(xiàn)象;當(dāng)染毒劑量增至160mg/mL及320mg/mL時(shí),在染毒后72h均出現(xiàn)明顯的亞二倍體峰即凋亡峰,并呈現(xiàn)出一定的量效、時(shí)效關(guān)系.2.芥子氣對(duì)小鼠表皮干細(xì)胞的影響 該研究利用表皮干細(xì)胞具有慢周期性的特點(diǎn),采取5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU

3、)標(biāo)記滯留術(shù)進(jìn)行表皮干細(xì)胞的分離鑒定.3.小鼠表皮基底細(xì)胞培養(yǎng)條件的初步探索 該研究主要采用以下三種方法:組織塊培養(yǎng)法、有血清培養(yǎng)法(無滋養(yǎng)層)、有血清培養(yǎng)法(有滋養(yǎng)層).a.組織塊培養(yǎng)法在接種后2天可見表皮基底細(xì)胞呈膜狀移行生長(zhǎng),細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多角形,彼此緊密相連成單層膜.7天表皮細(xì)胞成片生長(zhǎng)呈典型的"鋪路石"狀,并在生長(zhǎng)過程中形成特異性的"拉網(wǎng)"現(xiàn)象.b.采用有血清培養(yǎng)液,單純多聚賴氨酸鋪被培養(yǎng)皿,以胰蛋白酶消化法獲得的小鼠耳廓表