PCSK9基因D374Y突變體對HepG2細胞功能的影響及轉基因豬的制備.pdf

1、PCSK9是人類高膽固醇血癥的主效基因，介導肝臟細胞LDLR蛋白的胞內溶酶體降解途徑，抑制肝臟對血液中LDL-c的清除作用，從而使膽固醇水平上升。PCSK9的高表達或功能獲得性突變與動脈粥樣硬化疾病有直接的關系，而且影響肝臟功能、肝臟損傷修復、膽固醇運輸?shù)刃誀?。為了評估PCSK9過表達對肝臟細胞功能的潛在影響，本文利用HepG2細胞對增殖、遷移、膽固醇運輸?shù)缺硇瓦M行了檢測，結果顯示，PCSK9過表達不影響HepG2細胞的增殖能力，但是顯

2、著抑制細胞的遷移和膽固醇外排的能力。PCSK9對肝臟細胞的遷移能力的抑制與膽固醇的調節(jié)關系密切。游離膽固醇在細胞膜上的無序分布干擾了小G蛋白活性的發(fā)揮和脂筏相關受體參與的信號通路的傳導，并參與Erk信號通路的調控。豬的心血管系統(tǒng)和血脂代謝方面與人類非常相近，是研究動脈粥樣硬化疾病的有力工具。然而豬的個體差異較大，自然發(fā)病的動物缺乏，且誘導病征發(fā)生緩慢，因此沒有小鼠等模式動物的應用廣泛。為了加快疾病發(fā)生進程，本研究將PCSK9的獲得性突變

3、體D374Y在豬體內過表達，以期模擬動脈血管的病理學變化。本文中使用人APO啟動子調控PCSK9的表達，在人肝癌細胞系HepG2細胞中驗證了轉基因載體的有效性，并得到了轉基因豬個體。RNA、蛋白水平的結果顯示，人PCSK9基因在豬的肝臟中實現(xiàn)了高表達。同時，組織學檢測結果表明，轉基因豬的肝臟有明顯的病變，且免疫組化染色結果顯示，轉基因豬肝臟LDLR表達量極顯著的低于野生型豬。本研究成功獲得了人PCSK9過表達的體細胞克隆豬，能夠有效的控