胎兔缺氧缺血性腦損傷模型的建立及缺氧缺血時(shí)間探討.pdf

1、目的:
　　建立29天胎齡的胎兔持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血性腦損傷模型，探討合適的持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血時(shí)間，為深入研究新生兒缺氧缺血性腦損傷的發(fā)病機(jī)制、預(yù)防和治療提供合適的動(dòng)物模型。
　　方法:
　　選擇孕29天的健康新西蘭白兔共19只，實(shí)驗(yàn)組15只，對(duì)照組4只。聯(lián)合全身麻醉（包括誘導(dǎo)麻醉和維持麻醉兩個(gè)階段）和腰麻對(duì)孕兔進(jìn)行麻醉，孕兔左側(cè)股動(dòng)脈插入4F Fogarty動(dòng)脈取栓導(dǎo)管，插入深度為10cm，使球囊的位置位于腎動(dòng)脈開(kāi)口下端、

2、子宮動(dòng)脈開(kāi)口上端，實(shí)驗(yàn)組向?qū)Ч芮蚰覂?nèi)注入300μl生理鹽水，阻斷球囊以下水平血供（包括子宮和下肢血供），并保留20分鐘、25分鐘、28分鐘、30分鐘、40分鐘（各取孕兔3只）后拔出導(dǎo)管;對(duì)照組不注入生理鹽水?dāng)U張球囊，插入4F Fogarty動(dòng)脈取栓導(dǎo)管保留30分鐘后拔出導(dǎo)管。
　　孕兔術(shù)中監(jiān)測(cè)項(xiàng)目包括:
　　1.孕兔呼吸、心率等變化情況。
　　2.右耳中動(dòng)脈取血送檢血?dú)夥治觯O(jiān)測(cè)孕兔血PH、PaO2、PaCO2等。

3、r>　　3.插管前后右側(cè)股動(dòng)脈血壓、脈搏變化情況。
　　孕兔術(shù)后24h行剖宮產(chǎn)，將新生兔置入設(shè)定35℃的嬰兒培養(yǎng)箱內(nèi)保暖。
　　1.紀(jì)錄新生兔一般情況，如出生體重、死胎率等。
　　2.采用神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分量表評(píng)估新生兔神經(jīng)行為學(xué)狀況及受損程度。
　　3.制作病理切片，采用鏈霉卵蛋白素-過(guò)氧化物酶法，用凝集素IB4和異凝集素TL了解小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況，用TUNEL法了解腦細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　

4、1.誘導(dǎo)麻醉導(dǎo)致孕兔呼吸頻率和PaO2明顯降低，而PaCO2增高(P＜0.05);進(jìn)入維持麻醉階段后，孕兔呼吸頻率和血PaO2、PaCO2逐漸趨向穩(wěn)定(P＞0.05);麻醉對(duì)孕兔心率的影響較小，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，孕兔心率無(wú)明顯變化(P＞0.05)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)麻醉的反應(yīng)性相似，各時(shí)間點(diǎn)兩組孕兔呼吸、心率、PaO2、PaCO2比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);但拔管后實(shí)驗(yàn)組孕兔血乳酸水平較對(duì)照組增高(P＜0.05)。
　　2.

5、實(shí)驗(yàn)組插管后孕兔右側(cè)股動(dòng)脈波動(dòng)消失，血壓測(cè)不出;對(duì)照組插管前后均可及明顯動(dòng)脈搏動(dòng)，血壓無(wú)明顯波動(dòng)(P＞0.05)。
　　3.剖宮產(chǎn)發(fā)現(xiàn)，持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血時(shí)間為20分鐘時(shí)，胎兔未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，死胎率為0;持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血時(shí)間為28分鐘、25分鐘時(shí)，死胎率分別為41.7％、12.5％;當(dāng)持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血時(shí)間≥30分鐘時(shí)，所有的胎兔均死亡，死胎率達(dá)100％。提示持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血時(shí)間越長(zhǎng)，越少的新生兔存活，死胎率逐漸升高(P＜0.05)。

6、
　　4.持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血20分鐘組存活新生兔神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);但持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血時(shí)間≥25分鐘時(shí)，存活新生兔的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯低于對(duì)照組，且神經(jīng)行為學(xué)異常隨缺氧缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而更突出(P＜0.05)。
　　5.對(duì)照組腦組織小膠質(zhì)細(xì)胞呈樹(shù)枝狀;缺氧缺血組腦組織小膠質(zhì)細(xì)胞大量被激活，呈阿米巴樣，且單位面積內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目多于對(duì)照組（P＜0.05）。持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血實(shí)驗(yàn)組存活新生兔腦組