選擇性頭部亞低溫治療新生兔缺氧缺血性腦損傷的研究.pdf

1、目的：建立一種新的新生兔缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型，對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。應(yīng)用自行研制的亞低溫治療儀，先對(duì)動(dòng)物頭皮溫度與腦溫之間的關(guān)系進(jìn)行研究，再通過形態(tài)學(xué)檢查以及測(cè)定反映神經(jīng)系統(tǒng)損傷情況的生化指標(biāo)，探討這種新的亞低溫療法對(duì)新生動(dòng)物的影響，并對(duì)亞低溫治療儀療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)腦組織標(biāo)本中Nogo-A和GAP-43蛋白表達(dá)，初步探討亞低溫對(duì)Nogo和GAP-43蛋白表達(dá)的影響，為亞低溫的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：

2、選擇孕期30d的孕兔，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、缺氧5分鐘組、缺氧10分鐘組和缺氧15分鐘組。窒息相應(yīng)的時(shí)間后剖宮產(chǎn)出新生兔，觀察新生兔的皮膚、呼吸、活動(dòng)能力、肌張力情況，4天后作磁共振影像(MRI)檢查，5天后采用HE染色和光鏡觀察新生兔腦組織結(jié)構(gòu)改變，并作病理評(píng)分，對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用自行研制的亞低溫治療儀對(duì)所制備的缺氧缺血性新生兔進(jìn)行頭部降溫，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦溫從36℃降至28℃，對(duì)動(dòng)物頭皮溫度與腦溫進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，研究?jī)烧叩南嚓P(guān)性；將實(shí)驗(yàn)動(dòng)

3、物分為正常對(duì)照組、亞低溫干預(yù)組、室溫恢復(fù)組，通過頭顱磁共振掃描，病理切片、尼氏染色進(jìn)行形態(tài)學(xué)方面的檢查，測(cè)定動(dòng)物血液神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)和髓鞘堿性蛋白(MBP)含量反映腦皮質(zhì)神經(jīng)元、腦白質(zhì)損傷情況，對(duì)亞低溫治療儀的療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。亞低溫治療24小時(shí)后，應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)標(biāo)本中Nogo-A和GAP-43蛋白，比較各組標(biāo)本陽性細(xì)胞的個(gè)數(shù)，初步探討亞低溫對(duì)Nogo和GAP-43表達(dá)的影響。 結(jié)果：缺氧10分鐘組新生兔出生時(shí)的一

4、般情況、MRI影像學(xué)檢查符合窒息后HIBD動(dòng)物的變化特點(diǎn)，正常對(duì)照組、缺氧5分鐘組和缺氧10分鐘組病理評(píng)分分別為(4±0，5.44±1.13，13.3±2.39)，缺氧5分鐘組與正常對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，缺氧10分鐘組與正常對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。缺氧15分鐘組新生兔生后6小時(shí)內(nèi)全部死亡，不作MRI影像學(xué)檢查及病理評(píng)分。 對(duì)頭皮溫度與顱內(nèi)溫度進(jìn)行相關(guān)回歸分析，得回歸方程：Y=14.259+0.

5、589X，相關(guān)系數(shù)r=0.934，對(duì)r進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05，說明頭皮溫度與顱內(nèi)溫度有較強(qiáng)的直線正相關(guān)關(guān)系。室溫恢復(fù)組的頭顱MRI提示腦水腫、白質(zhì)與灰質(zhì)之間的界限模糊不清等影像表現(xiàn)，亞低溫干預(yù)組的影像學(xué)表現(xiàn)類似正常對(duì)照組；室溫恢復(fù)組的病理學(xué)呈現(xiàn)神經(jīng)元的變性、壞死和丟失，亞低溫干預(yù)組未見凍傷的病理表現(xiàn)，未見明顯的細(xì)胞壞死；測(cè)定血清NSE含量和MBP含量(ug/L)，室溫恢復(fù)組較正常對(duì)照組及亞低溫干預(yù)組明顯增高，差異有顯著性(P＜0.05)

6、。 生后24h各組免疫組化Nogo-A和GAP-43蛋白陽性細(xì)胞平均個(gè)數(shù)，亞低溫干預(yù)組與室溫恢復(fù)組相比差異有顯著性(P＜0.05)，而室溫恢復(fù)組又與正常對(duì)照組相比差異有顯著性(P＜0.05)。 結(jié)論：1.向孕兔輸7％二氧化碳的氮?dú)?0分鐘使其窒息后迅速剖宮產(chǎn)取出新生兔是簡(jiǎn)單、快速、可靠的制備HIBD模型的方法。 2.在一定的溫度范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頭皮溫度與顱內(nèi)溫度有較強(qiáng)的直線正相關(guān)關(guān)系，可通過對(duì)頭皮溫度的測(cè)定，間接