暴發(fā)性肝衰竭腸道樹(shù)突狀細(xì)胞的變化.pdf

1、目的:暴發(fā)性肝衰竭是一種嚴(yán)重的肝細(xì)胞短時(shí)間內(nèi)大量壞死或肝臟功能異常的肝臟損傷綜合征，其常見(jiàn)并發(fā)癥為自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎，自發(fā)性腹膜炎是由于腸道細(xì)菌過(guò)度集聚和腸道細(xì)菌移位引起的，而腸道細(xì)菌移位的典型病理特征為腸道通透性增加和腸道黏膜的破壞。樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答以及監(jiān)視腸道免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)過(guò)程中扮演重要角色，作為專職抗原提呈細(xì)胞腸道黏膜的變化與DCs息息相關(guān)。因此通過(guò)檢測(cè)腸道DCs的變化可以了解腸道黏膜的繼發(fā)改變，為控制并發(fā)癥保護(hù)

2、肝損傷尋找新的切入點(diǎn)。
　　方法:制備暴發(fā)性肝衰竭小鼠模型;取小鼠小腸組織，0.9％生理鹽水沖洗后一部分4％多聚甲醛固定用于免疫組化染色，其余部分-80℃凍存用于Western Blot和RealtimePCR檢測(cè)。其中CD11b/c、CD86、CD74和CD3采用免疫組化、Western Blot和Real time PCR方法檢測(cè);而CD83采用免疫組化和Real time PCR的方法檢測(cè)。
　　結(jié)果:模型組(FHF,

3、D-Galn+LPS)小鼠的一般活動(dòng)狀態(tài)發(fā)生改變，從第6小時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)死亡，9小時(shí)死亡率達(dá)到20％。免疫組化染色顯示，F(xiàn)HF組CD11b/c不同于NS組僅分布在基底層，還分布在淋巴管，并且CD11b/c和CD83陽(yáng)性明顯增多，CD11b/c和CD83積分光密度值(IOD)分別為:FHF組7988400±385941和13875000±467493、D-Galn組7262400±332512和10794000±256612、LPS組6716

4、500±338314和12494000±532134、NS組1102400±132273和9257600±400364。與NS組相比，F(xiàn)HF、LPS和D-Galn組的CD11b的蛋白表達(dá)明顯升高，CD11b的蛋白相對(duì)表達(dá)量為:D-Galn組3.888±1.39、LPS組7.7091±1.10、FHF組5.4817±0.77、NS組1.4073±0.37;此外CD11b在基因水平屬于整合素家族，CD11b為整合素α(Itg-α)，我們的研

5、究結(jié)果顯示Itg-α和CD83mRNA明顯升高，其中Itg-αmRNA和CD83mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為:FHF組1.1224±0.3和3.6986±0.40、D-Galn組1.1347±0.24和2.4554±0.46、LPS組1.2301±0.17和2.8982±0.31、NS組0.4907±0.19和1.0762±0.22，由此我們可以推斷出DCs在FHF條件下，大量成熟。另外免疫組化染色檢測(cè)DCs表達(dá)的共刺激分子CD86，結(jié)果顯

6、示其陽(yáng)性明顯升高，IOD值分別為:D-Galn組7262400±332512、LPS組6716500±338314、FHF組7988400±385941、NS組1102400±132273;CD86蛋白相對(duì)表達(dá)量為:D-Galn組2.9042±0.53、LPS組2.7299±0.47、FHF組4.2673±0.69、NS組1.1379±0.42，CD86mRNA相對(duì)表達(dá)量為:D-Galn組1.5413±0.33、LPS組1.5472±0

7、.18、FHF組1.5801±0.32、NS組0.8846±0.10(p＜0.05)，說(shuō)明發(fā)生FHF時(shí)腸道DCs發(fā)揮了生物學(xué)效應(yīng)。與DCs生物學(xué)效應(yīng)相關(guān)的還有主要組織相容性復(fù)合體分子途徑，因此我們檢測(cè)了MHCⅡ類分子途徑的不變鏈CD74，結(jié)果顯示CD74電明顯升高，CD74組化染色I(xiàn)OD值為:FHF組11056000±431427、D-Galn組9109100±272745、LPS組11278000±396031、NS組4633400±

8、267903;CD74相對(duì)蛋白表達(dá)量為:FHF組2.3513±0.52、D-Galn組2.2994±0.72、LPS組2.3891±0.47、NS組1.1298±0.33;CD74mRNA相對(duì)表達(dá)量為:FHF組1.5383±0.26、D-Galn組1.4337±0.31、LPS組1.7559生0.24、NS組0.7648±0.22，(p＜0.05)。最后驗(yàn)證了效應(yīng)T細(xì)胞的特異性表面標(biāo)記CD3，發(fā)現(xiàn)CD3的表達(dá)也明顯升高，且FHF組CD3

9、表達(dá)明顯高于其他組，其中CD3組化染色I(xiàn)OD為:FHF組1901600±60252、D-Galn組671520±22440、LPS組775098±29981、NS組75410±103860;CD3蛋白相對(duì)表達(dá)量為:FHF組1.6782±0.09、D-Galn組0.7418±0.03、LPS組1.5929±0.05、NS組0.3864±0.02;CD3mRNA相對(duì)表達(dá)量為:FHF組2.2842±0.23、D-Galn組2.2412±0.1