幽門螺桿菌感應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白CrdR的原核表達(dá)及其在酸適應(yīng)調(diào)控中的作用.pdf

1、目的:原核表達(dá)幽門螺桿菌26695標(biāo)準(zhǔn)株的感應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白CrdR，并初步探討其在酸適應(yīng)調(diào)控中的作用，為從細(xì)菌適應(yīng)環(huán)境的生理角度探索抗感染的新途徑提供實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:以提取的幽門螺桿菌26695標(biāo)準(zhǔn)株基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增hp1365基因;將其克隆至載體pGEX-6P-1中，構(gòu)建pGEX-hp1365載體，通過雙酶切和DNA測(cè)序鑒定后，轉(zhuǎn)化E.coli JM109，IPTG誘導(dǎo)表達(dá);表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAG

2、E分析、Western blot鑒定;目的蛋白大量表達(dá)后經(jīng)親和層析法純化，免疫家兔制備抗重組CrdR蛋白的兔免疫血清，通過Western blot分析CrdR蛋白在不同pH條件下的表達(dá)量，探討CrdR調(diào)節(jié)蛋白在幽門螺桿菌酸適應(yīng)調(diào)控中的作用。
　　 結(jié)果:經(jīng)PCR擴(kuò)增的hp1365基因全長(zhǎng)642bp，與hp1365基因大小一致;重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-hp1365經(jīng)雙酶切和DNA測(cè)序鑒定，插入的片段與hp1365基因序列完全一致;S

3、DS-PAGE分析表達(dá)的重組蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為25KDa，蛋白含量為60％，以包涵體形式表達(dá);Western blot鑒定為CrdR蛋白;制備了抗重組CrdR蛋白的兔免疫血清;Western blot分析顯示，在不同pH培養(yǎng)條件下，幽門螺桿菌CrdR蛋白在pH5的培養(yǎng)基條件下表達(dá)量最高，并隨著pH增高其表達(dá)量呈遞減趨勢(shì)。
　　 結(jié)論:成功原核表達(dá)了幽門螺桿菌26695標(biāo)準(zhǔn)株CrdR蛋白，該蛋白在幽門螺桿菌酸適應(yīng)中起到調(diào)控作用，