幽門螺桿菌裂解液對β-連環(huán)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,H.pylori)是胃炎、消化性潰瘍發(fā)生的主要致病因子,并且與胃癌的發(fā)生密切相關(guān),在1994年被世界衛(wèi)生組織列為I類致癌原。
　　 胃癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一,占全部惡性腫瘤死亡的23.2%,占惡性腫瘤死亡的第一位。
　　 Wnt/β-連環(huán)蛋白(β-catenin)通路異常激活與胃癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。Β-連環(huán)蛋白是連環(huán)蛋白(catenin,cats)家族中的一

2、員,是Wnt信號傳導(dǎo)通路的下游元件,己知Wnt信號激活使β-連環(huán)蛋白發(fā)生核轉(zhuǎn)位,并與轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子TCF/LEF家族成員結(jié)合形成復(fù)合體,該復(fù)合體與c-myc,CyclinDl等靶基因結(jié)合,并啟動(dòng)這些基因轉(zhuǎn)錄,使細(xì)胞過度增殖,導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。Β-連環(huán)蛋白也是E-鈣黏蛋白/連環(huán)蛋白復(fù)合體的重要組成部分,可以協(xié)助E-鈣黏蛋白發(fā)揮同質(zhì)性黏附功能,抑制腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移。
　　 本研究通過分析H.pylori超聲裂解液對β-連環(huán)蛋白在細(xì)胞核內(nèi)的表

3、達(dá)變化,c-myc,CyclinDl基因mRNA水平的表達(dá)的影響,以及對細(xì)胞增殖的影響。分析幽門螺桿菌在胃癌發(fā)生的機(jī)制。
　　 本實(shí)驗(yàn)的目的是研究H.pylori超聲裂解液刺激人胃上皮細(xì)胞GES-1后,細(xì)胞核內(nèi)β-連環(huán)蛋白表達(dá)的變化,對Wnt/β-連環(huán)蛋白通路下游基因CyclinDl和c-myc表達(dá)和細(xì)胞增殖的影響。闡明幽門螺桿菌對Wnt/β-連環(huán)蛋白通路的影響和導(dǎo)致胃癌發(fā)生發(fā)展可能的機(jī)制。
　　 方法:1.用H.pyl

4、ori超聲裂解液刺激人胃上皮細(xì)胞GES-1,免疫熒光法觀察細(xì)胞核內(nèi)β-連環(huán)蛋白表達(dá)變化。2.Westernblotting檢測刺激后細(xì)胞核內(nèi)β-連環(huán)蛋白表達(dá)量的變化情況。3.利用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(QRT-PCR)檢測Wnt/β-連環(huán)蛋白信號下游基因CyclinDl和c-myc基因mRNA表達(dá)水平。4.MTT法分析H.pylori裂解液刺激12h,24h和36h后GES-1細(xì)胞增殖情況。
　　 結(jié)果:1、H.pylori超聲裂

5、解液刺激胃上皮細(xì)胞GES-112h和24h后,在激光共聚焦顯微鏡下觀察到紅色熒光,24h比較明顯。2、Westernblotting檢測顯示H.pylori超聲裂解液刺激胃上皮細(xì)胞GES-1后12h和24h細(xì)胞核內(nèi)β-連環(huán)蛋白表達(dá)增高,24h組的表達(dá)量明顯高于12h組和對照組(P＜0.01)。3、H.pylori超聲裂解液刺激胃上皮細(xì)胞GES-1后,CyclinDl基因mRNA的表達(dá)量在刺激12h后表達(dá)量明顯升高(P＜0.01),c-m

6、yc基因mRNA的表達(dá)量在刺激24h后表達(dá)量明顯升高(P＜0.01)。4、MTT法檢測顯示,H.pylori超聲裂解液刺激GES-1細(xì)胞12h,24h和36h后,引起細(xì)胞增殖的增加。
　　 結(jié)論:H.pylori超聲裂解液可以導(dǎo)致胃上皮細(xì)胞β-連環(huán)蛋白在細(xì)胞核內(nèi)的聚集,并相繼引起細(xì)胞核內(nèi)CyclinDl基因和c-myc基因mRNA表達(dá)水平的增高。提示H.pylori超聲裂解液可能通過激活Wnt/β-連環(huán)蛋白信號途徑,引起其下游靶