c-jun氨基末端激酶在蛛網(wǎng)膜下腔出血后癥狀性腦血管痙攣中作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后兔腦血管痙攣模型的基底動(dòng)脈病理改變 目的:建立兔頸動(dòng)脈結(jié)扎后枕大池穿刺二次注血后的蛛網(wǎng)膜下腔出血模型，觀察其神經(jīng)行為學(xué)和基底動(dòng)脈的病理學(xué)改變。方法:l采用右側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎后枕大池二次注血的方法(兩次注血時(shí)間間隔為48小時(shí))制成兔蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)模型。實(shí)驗(yàn)30只兔隨機(jī)分為5組，即結(jié)扎右側(cè)頸動(dòng)脈后枕大池二次注射生理鹽水組作為對(duì)照組、結(jié)扎后枕大池二次注血組(SAH3d組、SAH7d組、SAH10d

2、組、SAH14d組)，每組6只。觀察并比較各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物神經(jīng)行為學(xué)改變、對(duì)各組腦組織大體標(biāo)本的觀察、利用光鏡、電鏡對(duì)基底動(dòng)脈形態(tài)學(xué)觀察以及TUNEL染色技術(shù)觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡、免疫組化法檢測(cè)P—JNK及Caspase-3蛋白表達(dá)。結(jié)果:神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)：對(duì)照組在注射生理鹽水前后無明顯變化，SAH組均出現(xiàn)了神經(jīng)行為學(xué)的改變，且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。通過光鏡和透射電鏡檢查及橫截面積測(cè)量顯示出血后3d出現(xiàn)血管管腔狹窄、橫截面積減小、管壁增厚、內(nèi)皮細(xì)胞

3、變性，并隨時(shí)間推移加重，尤以7d為著，10d后緩解?；讋?dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞磷酸化JNK(P—JNK)在SAH后3d即呈陽性表達(dá)，7d最為明顯，10d后逐漸下降。SAH組基底動(dòng)脈壁出現(xiàn)胞漿濃縮、核染色質(zhì)濃縮邊集等凋亡樣改變、較多血管內(nèi)皮細(xì)胞TUNEL染色陽性，同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞中Caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)，而對(duì)照組無明顯上述表現(xiàn)，結(jié)果提示本實(shí)驗(yàn)建立的癥狀性腦血管痙攣(cerebralvasospas—m，CVS)模型為較可靠的動(dòng)物模型，與文獻(xiàn)

4、報(bào)道一致。結(jié)論:1．本實(shí)驗(yàn)制作的癥狀性CVS模型，在二次注血后均出現(xiàn)神經(jīng)行為學(xué)改變，大多于2d后緩解，漸恢復(fù)正常。血管痙攣在注血后3d開始，7d到達(dá)高峰，10d后逐漸緩解。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示此模型較為滿意地模擬了臨床上SAH后癥狀性CVS的病理生理變化。2．SAH后血管內(nèi)皮細(xì)胞P—JNK表達(dá)上調(diào)，胞漿Caspase-3呈陽性表達(dá)，基底動(dòng)脈的血管內(nèi)皮TUNEL染色陽性細(xì)胞明顯增多，并且其活化水平在時(shí)程上的改變與基底動(dòng)脈病理生理變化密切相關(guān)，提示

5、JNK介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可能在CVS的形成和發(fā)展中起到一定的作用。 第二部分JNK抑制劑對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后癥狀性腦血管痙攣的影響 目的/:研究JNK特異性抑制劑—SP600125對(duì)SAH后癥狀性CVS的影響，以探討蛛網(wǎng)膜下腔出血后CVS細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路機(jī)制。方法:24只兔隨機(jī)分為對(duì)照組(枕大池注入生理鹽水)、SAH(7d)組、DMSO組(SAH+載體dimethylsulfoxideDMSO)和SP600125組(SAH+S

6、P600125)，每組6只，右側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎后枕大池二次注血的方法建立兔癥狀性CVS模型。應(yīng)用光鏡、透射電鏡、免疫組化等方法檢測(cè)各組動(dòng)物基底動(dòng)脈形態(tài)的變化，及使用SP600125干預(yù)后對(duì)上述表達(dá)的影響。結(jié)果:和對(duì)照組比較SAH組及DMSO組基底動(dòng)脈管腔明顯狹窄；P—JNK檢測(cè)見大量棕黃色的陽性細(xì)胞；血管內(nèi)皮細(xì)胞中Caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)；TUNEL染色陽性內(nèi)皮細(xì)胞較多；SAH組和DMSO組之間無明顯差異。應(yīng)用JNK特異性抑制劑的SP

7、600125組動(dòng)物腦基底動(dòng)脈狹窄改善，Caspase-3以及TUNEL染色陽性內(nèi)皮細(xì)胞與SAH組或DMSO組相比下降，有顯著差異(P＜0.05)，同時(shí)病理檢查顯示基底動(dòng)脈管壁增厚、內(nèi)皮細(xì)胞凋亡樣改變減輕，對(duì)照組與SP600125組比較差異不明顯。結(jié)論:1．JNK特異性抑制劑—SP600125能減輕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)行為學(xué)癥狀，明顯緩解SAH后腦血管痙攣，使Caspase-3以及內(nèi)皮細(xì)胞TUNEL染色陽性細(xì)胞減少，凋亡樣改變減輕。2．進(jìn)一步證