香蕉黑星病菌黑色素合成關(guān)鍵酶小柱孢酮脫氫酶基因SCD的克隆與敲除載體構(gòu)建.pdf

1、香蕉黑星病(Phyllostictamusarum)是一種真菌病害，主要危害香蕉的葉片和果實(shí)。為害葉片，導(dǎo)致葉片早衰，影響產(chǎn)量；為害果實(shí)，病果則因外觀差而導(dǎo)致商品價(jià)值降低。近幾年該病在我國(guó)的大部分香蕉種植區(qū)普遍發(fā)生，而且發(fā)生危害程度越來(lái)越嚴(yán)重。黑色素是以附著胞為侵染機(jī)構(gòu)的真菌的重要的毒力因子，附著胞黑色素化不良或不能產(chǎn)生黑色素的突變體，都會(huì)失去通過(guò)附著胞產(chǎn)生侵染釘而直接從植物表面侵入寄主的能力。形成黑色素化的附著胞從植物體表面直接侵入寄

2、主是香蕉黑星病菌主要的侵染方式?？寺∠憬逗谛遣【谏厣锖铣申P(guān)鍵酶編碼基因之一的小柱孢酮脫氫酶基因SCD，對(duì)深入研究該基因的功能奠定基礎(chǔ)，進(jìn)一步可為該病害的防治提供一個(gè)有效的作用靶標(biāo)。 本研究以香蕉黑星病原菌為材料，對(duì)其黑色素生物合成途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶編碼基因之一，即小柱孢酮脫氫酶基因SCD進(jìn)行了克隆和序列分析，并構(gòu)建了該基因的敲除載體pSH/SCD。結(jié)果如下： 1.用一對(duì)根據(jù)真菌SCD蛋白氨基酸保守序列設(shè)計(jì)的兼并引物

3、，從香蕉黑星病菌基因組DNA中通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得417bp的SCD基因片段，根據(jù)測(cè)序結(jié)果，設(shè)計(jì)特異性引物，用genomewalking技術(shù)獲得香蕉黑星病菌推測(cè)的SCD的全長(zhǎng)序列。該推測(cè)的SCD基因全長(zhǎng)1696bp，序列分析表明，該片段包括完整的開(kāi)放讀碼框(738bp)，其中含有一個(gè)長(zhǎng)29bp的內(nèi)含子。 2.根據(jù)香蕉黑星病菌推測(cè)的SCD基因全長(zhǎng)序列，用RACE技術(shù)和RT-PCR技術(shù)，獲得香蕉黑星病菌小柱孢酮脫氫酶基因的cDNA序列