MicroRNA-200b調(diào)控膀胱癌發(fā)生EMT與Notch信號(hào)通路關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　探討microRNA-200b調(diào)控膀胱癌發(fā)生EMT與Notch信號(hào)通路關(guān)系的內(nèi)在分子機(jī)制。
　　方法:
　　將has-miR-200b mimics及陰性對(duì)照組(scramble)用脂質(zhì)體Lip2000轉(zhuǎn)染膀胱癌T24、5637細(xì)胞,通過(guò)倒置顯微鏡觀察膀胱癌T24、5637細(xì)胞生長(zhǎng)及形態(tài)的變化;采用qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率;運(yùn)用RT-PCR及western blot技術(shù)檢測(cè)E-cadherin、N-cad

2、herin、vimentin、alpha-smooth muscle actin、Notch-1、Jagged-1的mRNA及蛋白表達(dá)變化;MTT檢測(cè)轉(zhuǎn)染后膀胱癌細(xì)胞株耐藥性的改變;采用Hoechst染色法檢測(cè)抗凋亡能力的改變;細(xì)胞凋亡率的改變通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè);轉(zhuǎn)染后的膀胱癌細(xì)胞株侵襲能力的變化運(yùn)用transwell來(lái)評(píng)估。
　　結(jié)果:
　　實(shí)驗(yàn)組的膀胱癌細(xì)胞數(shù)量變少,分布更分散,細(xì)胞的體積明顯增大,形態(tài)更加不規(guī)則;qRT

3、-PCR結(jié)果示:轉(zhuǎn)染48h后,miR-200b顯著性上調(diào)(P<0.05);RT-PCR及western blot結(jié)果表明:E-cadherin mRNA和蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05),N-cadherin、vimentin、alpha-smooth muscle actin、Notch-1、Jagged-1 mRNA和蛋白顯著下調(diào)(P<0.05);MTT結(jié)果提示:實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞對(duì)順鉑的抵抗力降低(P<0.05);Hoechst33342

4、表明:實(shí)驗(yàn)組的膀胱癌細(xì)胞株抗凋亡能力減弱(P<0.05);流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果示:實(shí)驗(yàn)組的早期晚期凋亡率顯著增加,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Transwell表明實(shí)驗(yàn)組膀胱癌細(xì)胞的侵襲能力明顯下調(diào)(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　上調(diào)microRNA-200b能通過(guò)抑制Notch-1、Jagged-1的mRNA及蛋白表達(dá),從而阻斷Notch信號(hào)通路,進(jìn)而抑制膀胱癌發(fā)生EMT;同時(shí)對(duì)膀胱癌細(xì)胞的耐藥性、抗凋亡能力、侵襲